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27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS表达/活性的调节及其代谢产物的影响
目的:前期工作表明,27-nt miRNA对eNOS的转录和表达有负反馈调节作用.本实验进一步探讨27-nt miRNA对血管内皮细胞eNOS的基因表达、活性调节及其代谢产物的影响.方法:构建27-nt miRNA高表达质粒,并将其转染至HUVECs.MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,Western Blot检测27-nt miRNA及细胞eNOS蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量.结果:27-nt miRNA对HUVECs的增殖有强烈的抑制作用(0.674±0.093 vs 0.315± 0.013,0.743± 0.076 vs 0.315± 0.013,P＜0.05);27-nt miRNA对HUVECs的迁移有显著的抑制作用(0.483± 0.009vs 0.806±0.017,0.465± 0.047 vs 0.806±0.017,P＜0.05);27-nt miRNA显著降低eNOS蛋白的表达(0.410± 0.004 vs 0.645±0.007,0.483±0.009 vs 0.645±0.007,P＜0.05)及明显抑制eNOS的活性(1.093± 0.357 vs 5.034± 0.509,1.707±0.652 vs 5.034± 0.509,P＜0.05);27-nt miRNA明显抑制NO的合成与释放(70.687± 4.432 vs 136.803±6.913,75.264±4.481 vs 136.803±6.913,P＜0.05).结论:27-ntmiRNA高表达明显抑制eNOS基因的表达及活性;27-ntmiRNA明显抑制NO的合成和释放,可能成为血管性疾病治疗的分子靶点.
关键词： 27-nt miRNA 内皮细胞 eNOs 代谢产物
