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UL29shRNA表达质粒与ACV对HSV-2抑制效果的比较
目的:通过将筛选的UL29shRNA表达质粒与抗病毒药物阿昔洛韦(ACV)的抗病毒效果及细胞毒性进行比较,探讨RNA干扰在细胞水平上对HSV-2病毒的抑制效果.方法:将筛选的干扰效果好的表达质粒UL29-shRNA 1641作为RNA干扰组与抗病毒药ACV进行对HSV-2的抑制效果的比较研究,分为RNAi组、ACV组和RNAi+ACV组.采用实时荧光定量PCR检测UL29mRNA的相对表达量,Karber法检测细胞上清液中病毒滴度的变化、蛋白印迹法(Western blot)检测ICP8的相对表达量,对RNAi与ACV抑制效果进行比较,通过WST-1(Water-Soluble Tetrazolium-1)法对质粒转染复合物(质粒+转染试剂)和ACV的细胞毒性进行比较.结果:RT-PCR检测三组mRNA的相对表达水平,其中RNAi组UL29基因相对表达量高于ACV组(P＜0.05);RNAi+ACV组UL29基因相对表达量明显低于RNAi组和ACV组(P＜0.05).Karber法检测三组细胞上清液病毒滴度表明,RNAi组病毒滴度高于ACV组(P＜0.05),RNAi+ACV组的病变病毒滴度明显低于RNAi组和ACV组(P＜0.05).Western blot检测ICP8相对表达量,ACV组的ICP8(UL29编码的单链DNA结合蛋白,主要作用是在HSV-2 DNA复制过程中与复制叉产生了单链DNA结合,防止其重新配对形成dsDNA或被核酸酶降解)相对表达量比RNAi组低(P＜0.05).RNAi+ACV组ICP8相对表达量降低为明显,与ACV组和RNAi组相比有显著差异(P＜0.05).WST-1法对转染复合物与ACV的细胞毒性进行比较,其中RNAi中质粒和转染试剂对细胞的毒性明显小于ACV.结论:在RNAi与ACV对HSV-2抑制效果的比较中,ACV要好于RNAi,两者联合使用的抑制效果好于单独使用RNAi或ACV.在抑制效果都较好的情况下比较,RNAi中使用的质粒与转染试剂对细胞的影响比ACV小.
关键词： RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL29基因shRNA 阿昔洛韦
