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硫酸酯化茯苓多糖对胃腺癌细胞MKN-45凋亡的影响
目的 探讨硫酸酯茯苓多糖(S-PCS3-Ⅱ)诱导胃腺癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养低分化胃腺癌细胞株MKN-45,加入不同浓度的硫酸酯茯苓多糖作用于MKN-45细胞不同作用时间后,利用细胞形态学、流式细胞术(FCM)、DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙/溴化乙锭双染法、透射电镜等实验方法观察对细胞凋亡的影响.结果 硫酸酯茯苓多糖作用MKN45细胞后,细胞形态学观察见抑制细胞生长,浓度为0.5g/L的硫酸酯茯苓多糖作用24h、48h、72h后其凋亡率分别为(7.92±0.83)%、(20.68±1.75)%、(37.52±2.47)%,且DNA凝胶电泳出现梯状条带.荧光显微镜和电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化.结论 硫酸酯茯苓多糖可诱导胃腺癌细胞凋亡来抑制胃腺癌细胞生长.
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热疗对胃癌细胞株化疗敏感性的影响
目的：探讨热疗时胃癌细胞株对紫杉醇（paclitaxel ，TAX）敏感性的变化。方法：用对TAX敏感的胃癌细胞株MKN-45经浓度梯度递增法建立胃癌 TAX耐药细胞株，命名为 MKN-45/TAX。采用免疫细胞化学染色法检测 MKN-45/TAX和MKN-45细胞中多药耐药相关基因（multi-drug resistance gene ，MDR1）的表达；采用CCK-8法检测不同温度和不同 TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率；采用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction ，RT-PCR）法、蛋白质印迹（Western blotting）法检测经靶向siRNA处理前后MDR1 mRNA和P糖蛋白（P-glycoprotein ，P-gp）的表达。结果：成功建立MKN-45/TAX。MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。随着紫杉醇浓度的增加，其对MKN-45及MKN-45/TAX的增殖抑制率增加；42℃时紫杉醇对MKN-45/TAX的增殖抑制率降低，而对MKN-45的增殖抑制率则升高。转染MDR1 siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降。结论：热疗联合化疗可增强耐药胃癌细胞株对TAX的耐药性，而增强敏感胃癌细胞株对TAX的敏感性，其机制可能与MDR1表达有关。
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鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响
目的：研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用CCK8检测不同浓度（0、1、10和25μmol/L）鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-4524、48、72和96 h 后对其增殖的影响；AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡；流式细胞仪检测细胞周期；利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化；DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果：1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为（28.82±0.002）%。随着鱼藤素浓度（10、25μmol/L）增加，作用时间（48、72、96 h）延长，其抑制作用增加，表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度（1、10和25μmol/L）鱼藤素作用于细胞48 h后，早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现，与对照组比较，1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后，S期细胞比例升高，G0/G1期及G2/M期细胞比例下降；10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后，G2/M期细胞比例升高，G0/G1期细胞比例下降（P<0.01）。倒置相差显微镜检查镜下则显示，1、10和25μmol/L 鱼藤素作用MKN-45细胞48 h后，可见典型凋亡样改变。 DAPI及Hoechst染色可见鱼藤素组细胞核皱缩变小、染色质浓聚和典型的凋亡小体。结论：鱼藤素可明显抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡。机制可能与细胞周期阻滞于S期及G2/M期有关。
