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99mTc标记的CXCR4小干扰RNA对人乳腺癌目的基因表达的影响
目的 探讨以靶向趋化因子受体4 (CXCR4)为靶点的99mTc标记小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞目的基因表达的影响,为后续的乳腺癌CXCR4-siRNA基因显像奠定基础.方法 人工设计合成三段针对CXCR4mRNA的siRNA,同时设计出阴性对照序列,质体分别包裹三段干扰序列,转染MDA-MB-231细胞,24h后进行PCR实验,检测CXCR4 mRNA的表达情况,在48 h后进行Western blot实验,检测CXCR4蛋白的表达,综合分析,选出佳干扰序列.使用螯合剂HYNIC对干扰效果好siRNA序列及siRNA(阴性对照)进行放射性99mTc标记,分别检测其标记率、放射性化学纯度、稳定性及干扰活性.多组间计量资料比较用方差分析进行比较,两组间计量资料比较用LSD-t检验进行比较.结果 三段不同序列siRNA作用于MDA-MB-231细胞后,CXCR4 siRNA1作用后的CXCR4 mRNA及蛋白表达量减少的情况与其它两条干扰序列差异有统计学意义.99m Tc-HYNIC-CXCR4siRNA1的标记率为(61.26±2.47)％(n=5),阴性对照99mTc-HYNIC-CXCR4 siRNA的标记率为(60.85±2.76)％(n=5).99mTc-HYNIC-CXCR4 siRNA1的稳定性好,放射性化学纯度均能达到90％.99mTc标记前后CXCR4siRNA干扰活性无差别.结论 CXCR4 siRNA探针能与CXCR4mRNA上的目的序列结合,抑制目的基因的表达.合成的探针分子稳定性好,具备活体乳腺癌显像的基础条件,有望为乳腺癌精准诊疗提供一条新路径.
