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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(三)—检测细胞凋亡过程中RPS3a水平的变化
目的:检测细胞凋亡过程中RPS3a水平的变化,探讨RPS3a在细胞凋亡中的作用.方法:用放射菌素D(Act D)诱导HL-60细胞发生凋亡,应用Western Blot法检测细胞凋亡过程中RPS3a水平的变化.结果:HL-60细胞在诱发凋亡1小时后,RPS3a的水平与对照组比较显著升高,之后迅速降低,在诱导2h时其水平已低于正常对照组的水平,并随时间推移逐渐降低,在细胞凋亡的晚期,即诱导6h时,RPS3a已降至不可检测的水平.结论:RPS3a水平出现的一过性增高随后迅速降低,这可能是发挥其核糖体外的功能,作为信号诱导细胞凋亡;在细胞凋亡的早期RPS3a的不可逆性降解致使核糖体的完整性丧失,从而抑制蛋白质的合成,终导致细胞凋亡.
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细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(二)--制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体
目的:制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体.方法:盐析法粗提抗体,用蛋白A-琼脂糖柱纯化IgG,ELISA法检测多克隆抗体水平.结果:ELISA法测定制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体的活性正常,产生了抗原-抗体反应复合物.结论:制备和纯化的抗体血清可以与GST/S3a融合蛋白相结合,产生抗原-抗体反应复合物,说明具有抗GST/S3a融合蛋白的活性.为下一步实验奠定基出.