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左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究
目的 探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响.方法 选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平；孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性；孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01)；与左归丸组比较,左归丸加 SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14d的矿化结节的促进作用(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路.
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ID1启动子的构建及其在不同细胞系中的表达
目的 观察不同细胞系中ID1启动子活性的表达的不同.方法 以大鼠的基因组DNA为模板克隆了长度为1742 bp(-1765/+88)的大鼠ID1启动子序列,将其连接到带有luciferase报告基因的PGL3-basic载体上,构建PGL3-ID1启动子序列.测序正确后,用磷酸钙共沉淀法转染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、A549细胞、F10细胞、MEF细胞和MC3T3细胞.转染36 h后,收取细胞应用荧光素酶报告基因系统检测PGL3-ID1报告基因的表达.结果 构建成功的PGL3-ID1启动子在A549细胞、F10细胞、MSCs细胞、MEF细胞中的表达明显增高,尤以4549和F10的表达为显著;在MC3T3细胞中表达不明显.结论 ID1启动子的活性与细胞的分化程度密切相关,可能对细胞的增殖和分化起了关键性的调控作用.
