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16S rDNA文库文献资料
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聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线技术在下呼吸道细菌鉴定中的应用
为探讨聚合酶链反应‐高分辨率熔解曲线（PCR‐HRM）技术在检测呼吸道菌群中的应用，本研究用支气管镜从慢性阻塞性肺病患者下呼吸道采集分泌液，提取细菌总DNA ，以16S通用引物27F／1492R扩增16S rDNA全长，PCR产物经电泳、纯化后连接到pGEMT‐Easy载体上，构建16S rDNA克隆文库。然后以16S rDNA V3区通用引物338F／518R扩增克隆文库，V3区PCR‐HRM分析在罗氏LightCycler 480实时荧光定量PCR系统中进行，采用HRM基因扫描软件分析数据。根据不同 HRM图型，挑选克隆株测序并鉴定菌株。结果显示，PCR‐HRM技术可灵敏区分下呼吸道不同细菌16S rDNA V3区，根据 HRM图谱可极大减少克隆菌株测序样本，提示PCR‐HRM技术可作为一种快速、高通量、敏感、经济的菌群多样性检测方法。
