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美国微生物学会会讯摘要
1.结核分枝杆菌可以阻碍吞噬体的成熟,从而避免被递入溶酶体.这一过程是由分枝杆菌的细胞壁类脂成分和其他的细菌分子,包括酶等来调控吞噬体内的成熟.过去只研究吞噬体内的pH值,或者仅研究细胞中与细胞膜相关的蛋白质,近来对吞噬体的成熟有了新的研究技术,例如用荧光能量共振转移显微镜(fluorescent energy resonance transfer microscopy,FERT)可以测定吞噬体-溶酶体的融合.
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应用荧光能量共振转移方法检测ApoE基因型
载脂蛋白E分子量为34kD,其突变位点位于第112位和158位密码子,这两个突变位点决定了ApoE的六种基因型,即纯合子E2/E2,E3/E3,E4/E4;杂合子E2/E3,E3/E4,E2/E4.据报道,ApoE的基因型与老年痴呆等疾病具有相关性.
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利用荧光共振能量转移技术研究TGF-β/Smad3信号转导通路
转移生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号转导通路与人类的多种生理病理发生机制相关,但是该信号通路中Smad3被磷酸化的时空信息仍然不完全清楚.为了动态观察活细胞生理状态下Smad3被磷酸化的过程,首先进行ECFP-Smad3-Citrine(Smad3 biosensor)融合蛋白表达载体的构建及鉴定;然后转染293T细胞并观察转染效率和融合蛋白表达情况.在荧光显微镜下,应用MetaFlour FRET 4.6软件测量TGF-β1刺激293T细胞前后Smad3 biosensor的荧光能量共振转移(FRET)的变化情况.结果显示,Smad3 biosensor转染效率达40％,融合蛋白表达成功.TGF-β1刺激293T细胞10 min后,监测到胞质内FRET值逐渐减小,青色荧光蛋白(CFP)减弱,黄色荧光蛋白变体(Citrine)增强,历时约300 s后逐渐恢复.应用FRET技术能使我们在活细胞生理状态下,实时动态监测TGF-β1/Smad3信号转导通路的过程.
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病毒蛋白质相互作用的研究方法及其应用
该文对研究病毒蛋白质之间以及病毒蛋白质与人体蛋白相互作用的几种实验方法的原理、作用机制、优缺点进行了综述.同时对各种在蛋白功能研究方法的新进展与运用进行了概述,展望了各种方法发展的前景.
