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LPS对MRL/MpJ小鼠脾T细胞表达TLR4和TNF-α的影响
研究Toll样受体4(TLR4)在MRL/MpJ小鼠脾细胞的表达状况和革兰阴性菌脂多糖(LPS)刺激后TLR4的表达变化以及对TNF-α产生的影响.MRL/MpJ小鼠经腹腔注射LPS后在不同时间取脾细胞,用三色荧光标记流式细胞仪技术检测小鼠脾T细胞TLR4的表达情况,并与BALB/c小鼠作对照;通过RT-PCR观察LPS刺激前后脾T细胞TNF-α mRNA的表达变化.结果表明TLR4在MRL/MpJ小鼠CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞中均有表达;但TLR4+/CD4+细胞表达仅BALB/c小鼠的33%,在受LPS刺激后,MRL/MpJ鼠CD4+T细胞TLR4升高时间较BALB/c小鼠延迟;CD8+T细胞TLR4在LPS刺激前后无明显变化;脾细胞TNF-α mRNA水平升高亦延迟.通过对干燥综合征样自身免疫病鼠模型MRL/MpJ小鼠脾T细胞TLR4的表达及功能研究,将有助于认识天然免疫和获得性免疫间的联系和感染在自身免疫病发病中的作用.
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狼疮性肾炎肾小球中nestin和活化型Caspase3的表达及意义
目的 探讨狼疮鼠肾小球中nestin和足细胞中活化型Caspase 3的表达变化及其与小鼠蛋白尿的关系.方法 选取30周龄雌性MRL/MPJ小鼠和MRL/faslpr小鼠为研究对象,分别设为对照组和狼疮性肾炎模型组.血、尿生化检测小鼠肾功能改变;采用免疫组化和Western blot技术检测小鼠肾小球中活化型Caspase 3蛋白的表达;免疫组化法检测小鼠肾小球中nestin蛋白的表达;免疫荧光双染技术检测肾小球中活化型Caspase 3与nestin共表达.结果 (1)与正常对照组相比,狼疮组小鼠24 h尿蛋白(Upro)明显升高(P＜0.05),而尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)在两组之间差异无显著性.(2)透射电镜结构显示,狼疮性肾炎模型组小鼠肾小球上皮细胞出现足突融合,基膜出现明显的不规则增厚.(3)与正常对照组相比,活化型Caspase 3在狼疮性肾炎模型组小鼠肾小球中表达增高;(4)免疫组化结果显示,nestin阳性信号主要定位于细胞质和细胞核,定量分析结果显示,与正常对照组相比,狼疮性肾炎模型组肾小球中nestin 蛋白表达上调.(5)免疫荧光双染检测结果显示,正常对照组中仅见nestin蛋白表达,未见明显的nestin和Caspase 3共定位表达,在狼疮性肾炎模型组小鼠肾小球中出现了nestin 蛋白和Caspase 3蛋白明显共定位.(6)相关性分析:狼疮性肾炎模型组小鼠肾小球中活化型Caspase 3蛋白的表达量与24 h Upro呈明显正相关(r=0.827,P=0.006).结论 足细胞骨架结构的改变和(或)足细胞凋亡可能在狼疮性肾炎发病过程中发挥重要的作用.
