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颗粒性肽-DNA复合疫苗抗肿瘤免疫的研究
诱导有效的抗肿瘤免疫应答是肿瘤免疫治疗的主要目标,由于肽疫苗和DNA疫苗具备较高的安全性和实用性,因而成为肿瘤疫苗学领域中发展为迅速的肿瘤免疫治疗方案之一.但是这两种疫苗形式仍然具有各自的缺点,其抗原呈递动力学存在显著差异,提示这两种疫苗可能存在互补性.本研究对多肽疫苗和DNA疫苗进行综合,设计出新型肽-DNA复合疫苗,并以P815A为模式抗原,证实了该种新型疫苗激发抗肿瘤免疫的有效性.
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BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型的建立
目的 研究建立BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型.方法 BALB/c小鼠尾静脉注入小鼠肥大细胞瘤P815细胞,实验按每只小鼠接种细胞数量分为1×107/只组、5×106/只组、2.5×106/只组、1×106/只组、5×105/只组、1×105/只组和溶剂(RPMI 1640 培养液)对照组.观察小鼠的生存状态、体重及肝肺脾(重量、形态、病理)、染色体、血涂片、骨髓涂片、白细胞及血小板计数.结果 注入P815细胞≥1×106/只的所有组小鼠均死亡,<1×106/只的所有组生存良好,且死亡小鼠的生存时间与注入细胞数量呈负向依赖关系(P<0.05).死亡组小鼠体重较注射前相当或减轻、肝肺脾重较对照组及未死亡组显著增加(P<0.05);肝质地变硬,表面可见大量大小不一的白色结节突起,部分脾肺可见出血梗死灶,病理示肝脾有大量异形肥大细胞瘤细胞浸润;脾细胞染色体分析可见肥大细胞瘤细胞的非正常染色体核型;白细胞和血小板计数较对照组降低(P<0.01),血涂片可见少量肥大细胞瘤细胞,骨髓涂片示骨髓原始细胞比例增高.结论 P815细胞通过静脉注射能使BALB/c小鼠形成肥大细胞瘤/白血病,可作为肿瘤实验研究的一种模型构建方法.
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CD88表型肥大细胞模型的建立
目的:观察CD88(C5a受体)在小鼠肥大细胞上的表达.方法:提取小鼠骨髓源肥大细胞(bone marrow-derrived mast cel,BMMC)和小鼠细胞肥大细胞系(P815,购自中科院),用PMA和离子霉素(Lincomycin)刺激处理肥大细胞24h后,流式细胞术检测小鼠肥大细胞CD88的表达.使用融合蛋白C5a刺激CD88表型肥大细胞后观察肥大细胞脱颗粒情况.结果:BMMC经过PMA和离子霉素处理24h后,CD88表达明显上调;小鼠肥大细胞系未出现明显上调.经融合蛋白C5a刺激后,CD88表型肥大细胞出现明显脱颗粒情况,并呈现浓度依赖性.
关键词： 小鼠骨髓源肥大细胞 P815 CD88(C5aR) -
新型颗粒性肽-DNA复合疫苗有效激发肿瘤抗原特异性CTL反应
目的设计新型抗肿瘤治疗性疫苗.方法以多聚赖氨酸为桥梁,将抗原肽与其编码基因并置于同-疫苗颗粒,进而设计出颗粒性肽-DNA复合疫苗.结果该疫苗可激发体内肿瘤特异性CTL反应,并对P815肿瘤具有特异性杀伤活性.结论该颗粒性肽-DNA复合疫苗有希望成为一种有效的肿瘤疫苗形式.
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基于α-病毒复制酶的高效小鼠P815肿瘤疫苗的构建和表达
目的克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的肿瘤特异P1A基因于含α-病毒复制酶的真核表达载体pSMART中,以制备P815肿瘤DNA疫苗.方法RT-PCR方法扩增P1A基因,以含α-病毒复制酶的哺乳细胞高效表达质粒pSMART为载体,构建重组肿瘤DNA疫苗.重组体经酶切和测序后,再用脂质体转化293人胚肾细胞,ECL western-blot法和免疫组化法鉴定转化细胞中P1A基因的表达.结果正确构建了P1A/pSMART重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达.结论成功构建了重组P1A/pSMART肿瘤DNA疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察.
