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稳定表达:抑制文献资料
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人PD-L1Ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究
为获取人PD-L1Ig融合蛋白,研究其对T细胞的调节效应,采用PCR法从pMD18-T/PD-L1中扩增出人PD-L1基因的胞外段序列,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1 Fc恒定区基因,两者拼接后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term,用脂质体法与两个辅助病毒载体共转染293T包装细胞,用含病毒颗粒的培养上清反复感染L929细胞,Zeocin筛选能稳定分泌人PD-L1Ig蛋白的基因转染细胞并亚克隆之,经无血清培养,收集的上清用Dot blot检测、ELISA定量后,浓缩并经Protein G柱纯化,再经Western blot鉴定.以FACS分析纯化蛋白对活化T细胞表达的PD-1结合能力,以体外T细胞活化体系观察其对T细胞表型的调节作用.结果表明,成功地构建了表达人PD-L1Ig蛋白的重组逆转录病毒载体;获得的L929/PD-L1Ig细胞能稳定分泌人PD-L1Ig蛋白;该蛋白与PD-1受体具有良好的结合能力,能抑制T细胞的进一步活化.
