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变性高效液相色谱仪文献资料
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DHPLC和DDF检测散发性卵巢癌p53基因突变的应用
目的:借助变性高效液相色谱仪(DHPLC)和荧光双脱氧指纹印迹法(F-DDF)检测散发性卵巢癌p53基因突变.方法:提取50例散发性卵巢癌标本DNA,使用DHPLC和F-DDF检测p53基因外显子5～8突变,其中测序证实18例p53基因外显子5～8有突变,F-DDF使用ddGTP和ddTTP扩增,Cy5标记其引物,DHPLC使用美国Transgenomic公司的WAVE系统.结果:18例突变都可以使用DHPLC的方法发现(敏感性100%),无假阳性和假阴性,F-DDF检测出16例突变标本(敏感性78%).就肿瘤的异质性而言(未知的突变型/野生型DNA比率),即使突变性DNA被野生性DNA稀释,DHPLC仍然能发现突变,说明这一方法的高度敏感性,根据等位基因丢失(LOH)判断,即使只有5%的突变DNA,DHPLC仍能发现异常,但这一异常难以被测序证实.结论:对于异质性肿瘤而言,DHPLC检测突变是可靠的,F-DDF的敏感性和特异性相对较低,这两种方法都能检测基因突变,DHPLC的缺点是费用昂贵,操作较复杂,而F-DDF优势在于不需要特殊的仪器及操作简便,可作为临床筛查基因突变的方法.
关键词： 卵巢癌 肿瘤异质性 变性高效液相色谱仪 荧光双脱氧指纹印迹法 p53基因突变
