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安氏隐孢子虫ATP结合盒式转运蛋白1基因的克隆与离子转运
目的 研究安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)ATP结合盒式转运(ATP-binding cassette,ABC)蛋白1基因对细胞内液和细胞外液中K+、Ca2+、Na+和Mg2+的转运作用. 方法 设计特异性引物,从安氏隐孢子虫基因组中PCR扩增CaABC1.构建真核表达质粒pEGFP-C1-CaABC1,采用脂质体转染法将重组质粒转染至小鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)中表达,设空白组(未转染质粒组)、对照组(转染空质粒pEGFP-C1组)和转染组(转染重组质粒pEGFP-C1-CaABC1组).用溶液离子浓度检测试剂盒检测IEC细胞内液和细胞外液中的K+、Ca2+、Na+和Mg2+的浓度. 结果 扩增出544 bp的CaABC1基因,构建了真核表达质粒载体pEGFP-C 1-CaABC1.转染小鼠IEC后,空白组未观察到绿色荧光,对照组和转染组均观察到绿色荧光.在细胞内液中,空白组K+、Ca2、Na+和Mg2+的浓度分别为(5.51±0.51)、(1.98±0.06)、(108.33±1.33)和(0.93±0.03) mmol/L,对照组分别为(6.25±0.70)、(1.90±0.13)、(107.73±1.79)和(0.87±0.05) mmol/L,转染组分别为(14.84±0.90)、(3.40±0.14)、(127.64± 1.49)和(1.72±0.20) mmol/L.在细胞外液中,空白组K+、Ca2+、Na+和Mg2+的浓度分别为(12.72±0.83)、(3.72±0.03)、(116.83±1.04)和(2.02±0.18) mmol/L,对照组分别为(10.11 ±0.90)、(3.58±0.06)、(115.89±1.86)和(1.71±0.41) mmol/L,转染组分别为(5.77±0.21)、(1.29±0.18)、(96.21±1.19)和(0.64±0.02) mmol/L.转染组K+、Ca2+和Mg2+与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 CaABC1蛋白具有协助转运K+、Ca2+和Mg2+离子的作用.
关键词： 安氏隐孢子虫 ATP结合盒式转运蛋白1基因 克隆 离子转运
