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补体成分Ficolin-A抗小鼠感染伯氏疟原虫的研究
目的 探讨免疫系统补体成分Ficolin-A抗伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)感染的效果. 方法 克隆扩增伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白MSP119基因,构建pGEX-KG-MSP119质粒.将pGEX-KG-Ficolin-A质粒和pGEX-KG-MSP119质粒分别转染至大肠埃希菌(E.coli)BL21,1 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Westernblotting)鉴定蛋白表达情况.40只小鼠随机均分为5组,Ficolin-A蛋白组和MSP119蛋白组小鼠每次注射蛋白20 μg,MSPl19蛋白+Ficolin-A蛋白组小鼠每次注射2种蛋白各20 μg,PBS对照组和GST对照组小鼠每次各注射PBS 200 μl和GST 20 μg,各组小鼠每2周免疫1次,共免疫4次.末次免疫后2周,各组小鼠腹腔注射感染伯氏疟原虫的红细胞300ul,分别于注射感染后第2、4、6、8和10天每组各取3只小鼠,尾静脉采血涂片,吉氏染色后,显微镜下计数感染的红细胞,计算疟原虫密度.感染疟原虫后第20天统计各组小鼠的存活数量. 结果 测序结果表明,pGEX-KG-Ficolin-A和pGEX-KG-MSP119质粒构建成功.SDS-PAGE和Western blotting结果表明,Ficolin-A融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为69 000,MSP119融合蛋白约Mr41 000,均与预测值相符.动物实验结果显示,感染后第2、4、6、8和10天,MSP119蛋白+Ficolin-A蛋白组小鼠的疟原虫密度均略低于其他4组,至感染后第10天,疟原虫密度为(22.2±1.7)％,略低于MSP119蛋白组[(33.4±2.7)％]、Ficolin-A蛋白组[(36.2±3.1)％]、GST对照组[(43.8±4.8)％]和PBS对照组[(45.3±3.6)％],但差异均无统计学意义(P＞0.05).感染后第20天,PBS对照组8只小鼠均死亡,Ficolin-A蛋白组存活小鼠数量(3只)与GST对照组(2只)比较,差异无统计学意义(P＞0.05);MSP1t9蛋白+Ficolin-A蛋白组存活小鼠数量(6只)显著高于GST对照组(P.＜0.05). 结论 补体成分Ficolin-A对降低小鼠疟原虫密度效果不明显,联合MSP119使用可提高小鼠感染疟原虫后的生存机会.
