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内质网应激在脂肪酸致肝细胞损伤中的作用
目的 通过建立不同的肝细胞脂肪变模型探讨脂肪酸对肝细胞内质网应激的作用,同时检测牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对脂肪变肝细胞内质网应激相关基因表达的影响.方法 以正常成人肝细胞株HL-7702为研究对象,以软脂酸或混合脂肪酸建立肝细胞脂肪变模型,以细胞计数试剂盒细胞增殖法测定和计算细胞活力,观察细胞形态和脂肪变情况,用三酰甘油试剂盒测定细胞内三酰甘油含量.予TUDCA干预,实时PCR方法检测肝细胞内质网应激前后葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA相对表达量.结果 混合脂肪酸浓度达0.5 mmol/L或软脂酸浓度达0.125 mmol/L即可影响肝细胞活力.单纯软脂酸对肝细胞的损伤作用较混合脂肪酸更强.混合脂肪酸组肝细胞内三酰甘油含量逐渐升高,软脂酸组肝细胞内三酰甘油含量仅于作用12 h时显著增加,其后则无显著改变.混合脂肪酸组不同浓度、不同作用时间下GRP78 mRNA和CHOP mRNA相对表达量与对照组相比差异均无统计学意义(P值均＞0.05).0.5 mmol/L软脂酸作用后肝细胞内CH()P mRNA相对表达量显著升高,但其对GRP78mRNA相对表达量无明显影响.1.0 mmol/L软脂酸作用后肝细胞内GRP78 mRNA和CHOP mRNA相对表达量均显著升高.TUDCA干预低剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后GRP78mRNA和CHOP mRNA相对表达量差异无统计学意义(P值均＞0.05).TUDCA干预高剂量软脂酸组肝细胞内质网应激前后CHOP mRNA表达量差异有统计学意义(12h时为8.6400比5.1032,24 h时为13.7948比6.4928,P值分别=0.042和0.017),但GRP78 mRNA表达量差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 相同的脂肪酸浓度下,软脂酸的比例越高对肝细胞的损伤作用越大.软脂酸呈时间剂量依赖性地调控肝细胞内质网应激.TUDCA可在一定程度上改善软脂酸引起的内质网应激.
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高浓度棕榈酸对正常肝细胞株糖皮质激素受体α-亚型表达的影响
目的: 研究高浓度棕榈酸对肝细胞糖皮质激素受体α亚型(GRα)表达的影响.方法: 用含有10%小牛血清的低糖DMEM培养基培养正常肝细胞株L02.1.0×105细胞接种到6孔板中,并用含有200 mmol/L棕榈酸的低糖DMEM培养基培养72 h,24 h换液1次,用实时荧光定量PCR进行定量分析GRαmRNA.结果: 高浓度棕榈酸培养72 h后,肝细胞内GRαmRNA水平是对照组(用含10%、不含脂肪酸牛血清白蛋白的低糖DMEM培养基培养72 h)的1.67倍.结论: 高浓度棕榈酸可以刺激肝细胞GRα上调表达.
