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Cox7a2荧光载体构建及其在小鼠睾丸Leydig细胞表达和定位研究
目的构建Cox7a2的荧光表达载体,研究其在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达和定位.方法原代培养小鼠睾丸Leydig细胞并利用3 β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达.利用Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ酶切位点把Cox7a2克隆到pEYFP-N1.细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-Cox7a2定位.结果Cox7a2表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中.绿色荧光的YFP-Cox7a2和红色荧光的线粒体标记物-Mitotracker有完全的共定位.结论Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建Cox7a2真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-Cox7a2定位在Leydig细胞的线粒体.这些结果将对老年男性睾丸间质细胞合成功能障碍的研究提供重要的信息.
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ATP50荧光表达载体构建及其在TM3小鼠睾丸Leydig细胞定位研究
目的:构建ATP50的荧光表达载体,研究其在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中的表达和在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中的定位.方法:原代培养小鼠睾丸Leydig细胞并利用3β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究ATP50在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达.利用Bam HI和Eco RI酶切位点把ATP50克隆到pEYFP-N1.细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-ATP50在TM3小鼠睾丸Leydig细胞的定位.结果:ATP50表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中.TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,绿色荧光的YFP-ATP50和红色荧光的线粒体标记物Mitotracker有完全的共定位.结论:ATP50在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建了ATP50真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-ATP50定位在Leydig细胞的线粒体.这些结果将对老年男性睾丸间质细胞睾酮合成功能障碍的研究提供重要的信息,有利于进一步深入研究.
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Cox7a2在TM3睾丸Leydig细胞中表达,定位及与ERK1/2磷酸化相关性研究
目的:研究Cox7a2的荧光表达载体在TM3睾丸Leydig细胞中的表达和定位及对ERK1/2磷酸化的影响.方法:将Cox7a2克隆到pEYFP-N1.细胞转染和细胞荧光显微镜观察其在TM3细胞中的表达和定位,Western blot检测ERK1/2磷酸化水平.结果:在TM3细胞中,绿色荧光YFP-Cox7a2和红色荧光线粒体标记物Mitotracker有完全的共定位,过量表达YFP-Cox7a2能引起ERK1/2磷酸化水平增高.结论:成功表达了YFP-Cox7a2融合蛋白,确认了其在TM3细胞的线粒体定位.YFP-Cox7a2过表达和ERK1/2磷酸化水平有联系,为探讨Cox7a2对TM3细胞睾酮分泌及其相关信号传导通路的影响奠定了基础.
