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人顶体蛋白酶原基因文献资料
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用于人顶体蛋白酶原基因表达调控和蛋白分选研究的转基因小鼠模型的建立
分别将构建的人顶体蛋白酶原基因(human proacrosin,hACR)5'侧翼序列,第1外显子和编码β-半乳糖苷酶的基因(lacZ)的融合基因(载体1),以及hACR基因5'侧翼序列与报告基因lacZ的融合基因(载体2),通过显微注射受精卵法制备转基因小鼠,结果如下:载体1:注射89只卵,移植入9只母鼠单侧输卵管中,3只怀孕,产仔9只,存活7只,基因组Southern杂交检出整合有外源基因的阳性小鼠1只,阳性率14.3%;子1代15只,基因组Southern杂交5只阳性.载体2:注射235只卵,移植入14只母鼠单侧输卵管中,4只怀孕,产仔11只,存活10只,基因组Southern杂交检出整合有外源基因的小鼠1只,阳性率10.0%.子1代小鼠10只,基因组Southern杂交3只阳性.进一步将检测lacZ在转基因小鼠体内的表达.
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人顶体蛋白酶原基因片段的克隆及与β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的融合基因载体的构建
为确定人顶体蛋白酶原基因特异的基因表达调控和蛋白分选的序列,从血白细胞中抽提人基因组,聚合酶链式反应(PCR)扩增该基因5'侧翼序列和第1外显子.将扩增获得的1 3 Kb片段克隆到pGEM-T中,经酶切鉴定和DNA序列测定确定为人顶体蛋白酶基因片段.将上述基因片段克隆到pGEM-4Z中,适当酶切后与pSV-β-Galactosidase中经酶切去除SV40早期启动子的两片段连接,终获得人顶体蛋白酶基因的5'侧翼序列和第1外显子与LacZ的融合基因载体,以及人顶体蛋白酶原基因5'侧翼序列与LacZ的融合基因载体.
