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ADAM10对小鼠颅颌面膜内成骨的影响
目的 探索解聚素样金属蛋白酶10(ADAM10)对小鼠颅颌面骨骼膜内成骨的影响.方法 应用组织免疫荧光染色及蛋白免疫印迹研究ADAM10在小鼠颅颌面骨中的不同时间点、不同部位的表达水平.通过cre-loxp技术在胚胎小鼠颅颌面骨骼中特异性敲除ADAM10基因,应用体视显微镜观察基因敲除小鼠的颅颌面畸形,X线检查、von Kos-sa染色检测基因敲除小鼠骨钙化情况,双标免疫荧光观察基因敲除小鼠骨组织细胞增殖、分化、凋亡能力的改变.结果 组织免疫荧光染色显示小鼠上、下颌骨成骨活跃区ADAM10表达明显,同时蛋白免疫印迹结果证实,ADAM10在小鼠出生前后表达高,成年后表达明显降低.大体观察基因敲除小鼠身体体型较小,颅颌面畸形表现为面中部发育不足,上下颌骨发育不足,颅顶塌陷.X线片检测及von Kosaa染色显示基因敲除小鼠全身骨骼密度减低,骨组织形成较弱.免疫荧光检测发现ADAM10基因敲除小鼠下颌骨细胞增殖、成骨分化能力减低、凋亡增加.结论 ADAM10广泛表达于小鼠膜内成骨区域,可能通过影响骨组织细胞增殖、分化及凋亡来调控小鼠颅面部膜内成骨过程.
关键词： 解聚素样金属蛋白酶10 颅颌面骨骼 膜内成骨 -
ADAM10在小鼠颅面部膜内成骨过程中的表达
目的观察解聚素样金属蛋白酶10（A disintegrin and metalloprotease 10，ADAM10）在小鼠颅面部骨骼膜发育过程中的表达变化。方法以野生型C57BL/6小鼠为实验对象，阿辛蓝-茜素红染色显示小鼠膜内成骨区域，结合免疫组织荧光，检测ADAM10在骨组织中的表达。三标免疫荧光观察ADAM10在MC3T3细胞系中亚细胞定位。蛋白免疫印迹检测ADAM10在小鼠出生前后的表达量变化。结果组织阿辛蓝茜素红染色显示小鼠前颅骨、鼻旁软骨、上颌骨、腭板和下颌骨成骨活跃，并结合免疫组织荧光检测，发现ADAM10在小鼠前颌骨、鼻旁软骨、上颌骨、腭板和下颌骨广泛表达，且主要表达在成骨活跃的区域。 MC3T3细胞三标免疫荧光检测进一步定位ADAM10广泛分布在胞浆中，在质膜和细胞核附近表达高；其胞核附近的高表达信号与高尔基体共标，提示其可能在高尔基体中加工后至细胞膜发挥功能。同时，蛋白免疫印迹结果证实，ADAM10在小鼠出生前后表达高，成年后表达明显降低。结论 ADAM10广泛表达于小鼠早期颅面部膜内成骨活跃区域，提示其可能调控小鼠颅面部膜内成骨过程。
关键词： 膜内成骨 解聚素样金属蛋白酶10 颅面部发育 -
二甲双胍刺激肝脏瘦素受体基因表达上调血浆可溶性瘦素受体水平
目的 探讨二甲双胍上调血浆可溶性瘦素受体(soluble leptin receptor,sOB-R)的可能机制.方法 42只6～8周龄健康雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常饮食(CD)组(n=21)及高脂饮食(HF)组(n=21).喂养5月后,CD组及HF组分别再随机分为3个亚组,每组7只,分别予蒸馏水(不用药对照组),二甲双胍50、200 mg/(kg·d)灌胃,灌胃15 d后取其血浆及肝、肾组织.ELISA法检测小鼠血浆可溶性瘦素受体(soluble leptin receptor,sOB-R)水平,Real-time PCR检测肝、肾脏组织中瘦素受体基因(OB-Rt、OB-Ra、OB-Rb、OB-Rc、OB-Rd)及解聚素样金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)、ADAM17基因的表达,Western blot检测肝、肾脏组织中ADAM10、ADAM17蛋白的表达.结果 与不用药对照组比较,给予不同剂量的二甲双胍后均能升高CD组和HF组小鼠血浆sOB-R,CD组中二甲双胍200 mg/(kg·d)组与其他2组比较,HF组中二甲双胍50、200 mg/(kg·d)组与不用药对照组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);sOB-R水平升高具有二甲双胍剂量依赖性效应.二甲双胍能上调肝脏瘦素受体基因OB-Rt mRNA的表达,并呈剂量依赖性升高,HF组瘦素受体上升更为明显;瘦素受体亚型OB-Ra、OB-Rc、OB-Rd的上升趋势与OB-Rt趋势一致.肾脏组织中,瘦素受体基因OB-Rt、OB-Ra、OB-Rb、OB-Rc、OB-Rd的表达水平在二甲双胍用药组及不用药对照组相比没有显著变化,CD组与HF组之间也没有显著差异.肝脏和肾脏组织中ADAM10、ADAM17表达量在CD组与HF组、二甲双胍用药组及不用药对照组之间均无显著改变.结论 二甲双胍能显著上调血浆sOB-R水平,该作用主要是通过刺激肝脏瘦素受体基因表达实现的,主要的来源是肝脏的短型瘦素受体.
