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差速分离文献资料
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复合胶原酶消化法制备高纯度小鼠雪旺细胞
目的 建立高效、快速获得大量高纯度雪旺细胞的方法,为组织工程神经构建提供优质、足量的种子细胞.方法 取新生6～7 d的小鼠,在解剖显微镜下分离双侧坐骨神经,0.25%复合胶原酶37℃消化90 min,然后将细胞悬液接种于预先用层粘蛋白铺盘的培养瓶,贴壁培养48 h后,0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞.经过两次纯化后,运用免疫细胞化学和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度.结果 经过两次纯化后,P75NTR免疫细胞化学及流式细胞仪检测证实,通过本方法可获得纯度为99%以上的雪旺细胞,每个25 cm2培养瓶可获得(102.8±5.9)×104个细胞.结论 复合胶原酶差速消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法,仅需5 d即可制备高纯度的雪旺细胞.
