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转铁蛋白-多聚乙烯亚胺体外转染小鼠骨肉瘤细胞的实验研究
目的评价转铁蛋白-多聚乙烯亚胺(transferrin-polyethylenimine,Tf-PEI)靶向性转染小鼠骨肉瘤细胞的可行性,并确定佳的转染条件.方法以Tf-PEI为载体,将绿色荧光蛋白基因和荧光素酶基因分别导入小鼠骨肉瘤细胞,用荧光显微镜及荧光素酶检测系统检测其转染效率.以游离转铁蛋白竞争性拮抗Tf-PEI,并观察它对转染效率的影响.结果Tf-PEI可以高效的、靶向性的转染小鼠骨肉瘤细胞.当N/P比值为5时,Tf-PEI的转染效率高.游离转铁蛋白能够显著的拮抗Tf-PEI的转染.结论Tf-PEI是一种高效率、低毒性、肿瘤靶向性的基因转染载体,它可以作为体外恶性肿瘤基因治疗试验的一个有效工具.
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腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶系统对骨肉瘤细胞的杀伤试验
目的探讨腺病毒介导的VEGF启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)系统(AdVEGF-tk)对体外培养的骨肉瘤细胞的选择性杀伤作用.方法采用2种重组腺病毒载体AdVEGF-tk和AdCMV-tk(CMV启动子调控tk基因表达)体外感染低表达VEGF的成骨细胞系MC3T3-E1和高表达VEGF的骨肉瘤细胞系LM8,并给予不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理,用MTT法检测感染细胞的增殖情况.结果未感染病毒或感染空病毒的MC3T3-E1细胞和LM8细胞对GCV不敏感,感染AdCMV-tk的MC3T3-E1细胞和LM8细胞对GCV敏感.与感染空病毒的MC3T3-E1细胞相比,感染AdVEGF-tk的MC3T3-E1细胞对GCV的敏感性轻度增加,用50 μg/ml GCV处理时,30% MC3T3-E1细胞被杀死;感染AdVEGF-tk的LM8细胞对GCV的敏感性明显增加,用50 μg/ml GCV处理时,95% LM8细胞被杀死,产生的细胞毒活性表现为剂量依赖性.结论腺病毒介导的VEGF启动子-tk/GCV系统对高表达VEGF的骨肉瘤细胞具有杀伤作用.
关键词： 血管内皮生长因子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 腺病毒 MC3T3-E1细胞 LM8细胞
