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MMPs激动剂和抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1/2以及Ⅰ型胶原表达的作用研究
目的 研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用.方法 应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1和MMP-2活性的影响；实时荧光定量反转录聚合酶链反应以及免疫印迹蛋白定量法检测比较激动剂组与抑制剂组对MMP-1/2以及Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的变化；后用siRNA干扰敲除MMP-1、MMP-2或MMP-1/2后,检测巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平的变化.结果 MMPs激动剂引起MMP-1/2活性显著增加,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达下降,MMPs抑制剂引起MMP-1/2活性显著下降,相应的Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达增加(均P＜O.01).激动剂可引起MMP-1 mRNA表达增加(P＜0.01),对MMP-2 mRNA表达无明显影响(P＞0.05),而抑制剂能引起MMP-2 mRNA表达下降(P＜0.01),但对MMP-1 mRNA表达无显著影响(P＞0.05).应用siRNA干扰方法敲除MMP-1、MMP-2或两者同时被敲除后,MMP-1蛋白表达均显著降低(均P＜0.01),MMP-2除在MMP-1 siRNA干扰敲除组无明显变化外(P＞0.05),其余各组均显著下降(均P＜O.01)；Ⅰ型胶原的表达在各敲除组中显著增加,当MMP-1和MMP-2均干扰敲除时,Ⅰ型胶原的表达增加为显著(均P＜0.01).结论 在人巩膜成纤维细胞系中,MMP-1/2激动剂和抑制剂均能引起MMP-1/2活性改变及相应的MMP-1/2蛋白表达变化,并终导致Ⅰ型胶原表达的变化；MMP-1和MMP-2是调控人巩膜Ⅰ型胶原重塑的关键因子.
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胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的 观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.方法 首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,CCK-8检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平的影响.结果 成功进行了人巩膜成纤维细胞的原代培养.人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA及蛋白水平的表达.胶原相关整合素α1β1 1 mg·L-1和4 mg·L-1抗体组细胞存活率分别为(86.3±4.5)％和(74.3±6.8)％,与对照组的100％相比,细胞存活率均显著下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且呈浓度依赖性的抑制作用.胶原相关整合素α2β1抗体在1mg ·L-1时有抑制作用,细胞存活率为(89.3±12.1)％,但与对照组的100％相比差异无统计学意义(P＞0.05),4mg· L-1抗体组细胞存活率下降为(74.5±6.6)％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).胶原相关整合素α1β1(4 mg·L-1)抗体组Ⅰ型胶原mRNA表达明显减低,是对照组的0.48倍(P＜0.05).胶原相关整合素α2β1抗体1 mg·L-1组和4 mg· L-1组Ⅰ型胶原mRNA表达分别是对照组的0.94倍和0.87倍,与对照组相比差异均无统计学意义(均为P ＞0.05).结论 人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位的表达.胶原相关整合素α1β1和α2β1影响人巩膜成纤维细胞的增殖.胶原相关整合素α1β1参与人巩膜成纤维细胞胶原的合成.
