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ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株耐酸性的影响
目的:分析ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株体外耐酸能力的影响.方法:利用电穿孔法,将siRNA转入UA 159-FR,使其与ffh基因靶向位点结合,筛选出含ffh基因沉默的变形链球菌耐氟菌株,与UA159-FR的标准菌液分别在不同pH值(以0.5为间隔,pH为3.5～7.5)的BHI液体培养基中37℃微需氧(95％N2、5％CO2)培养24 h,离心,采用pH计测定培养物上清的终末pH值;5 mL生理盐水稀释细菌沉淀,用紫外分光光度计测定600 nm处的吸光度,采用SPSS 17.0软件包对所得数据进行统计学分析.结果:原菌株UA159-FR与ffh基因沉默的变形链球菌UA 159-FR相比,△pH差异显著(P＜0.05),且前者高于后者.两者比较pH=3.5～5.0时,OD600有显著差异(P＜0.01);pH=5.5～7.5时,OD600有显著差异(P＜0.05),且两者生长趋势相似.结论:ffh基因沉默对变形链球菌耐氟菌株的耐酸性有一定影响.
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耐氟变形链球菌对树脂-牙本质粘接强度的影响
目的:探讨耐氟变形链球菌对树脂牙本质粘接强度的影响.方法:诱导培养耐氟变形链球菌UA 159-FR及其亲代菌株UA159,选用复合树脂Z350和自酸蚀粘接剂Single bond Universal,制备牙本质-树脂复合体试件.将试件分为4组,分别浸入UA159-FR菌液、UA159菌液、BHI培养基、PBS中孵育14 d,每48 h换液1次,之后进行推出试验,检测试件粘接强度的变化.扫描电镜下观察4组粘接断面的情况.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在UA 159-FR和UA159侵袭下,牙本质-复合树脂粘接强度显著降低,组间无显著差异.粘接界面多为混合破坏,扫描电镜下可见大量的树脂突及部分粘接面破坏.结论:耐氟变形链球菌可破坏复合树脂粘接界面,引起粘接强度下降,破坏程度在短期内与亲代菌株无显著差异.
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氟环境下变形链球菌耐氟菌株rpl基因的差异表达
目的:检测并分析变形链球菌耐氟菌株在氟环境下培养时rpl基因表达的改变.方法:分别将变形链球菌亲代菌株及耐氟菌株置于无氟脑心浸液(BHI)培养基,另将耐氟菌株置于含1 g/L NaF的BHI培养基中,均培养至11 h(对数生长期)、20 h(稳定生长期)后提取总RNA并逆转录,采用实时定量RT-PCR技术检测各组变形链球菌rpl基因的表达.结果:与无氟培养比较,高氟培养的耐氟菌株rpl基因表达在对数期无差异(P>0.05),而在稳定期表达升高(P<0.001);与亲代菌株比较,耐氟菌株在无氟及高氟培养基中rpl的表达量均明显下降(P<0.001).结论:氟可以增加稳定生长期的变形链球菌耐氟菌株rpl基因的表达.
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变形链球菌耐氟菌株gtfB基因失活菌株的构建
目的:构建变形链球菌 (S.mutans) 耐氟菌株UA159-FR中gtfB基因失活株, 为研究耐氟菌株gtfB基因的功能奠定基础.方法:培养UA159-FR并以其为模板扩增gtfB基因上游、下游同源臂片段, 以质粒pEGFP-N1为模板扩增kan基因;通过重叠延伸聚合酶链反应法 (overlap extension polymerase chain reaction, OE-PCR) 获取上述3个片段的同源重组片段;与pEASY-Blunt Cloning Vector连接形成重组质粒后, 进行PCR鉴定和测序鉴定;将重组片段电转化入UA159-FR感受态细胞中得到gtfB基因失活菌株, 并进行PCR鉴定.结果:经PCR鉴定和测序鉴定, 含有gtfB基因重组片段的重组质粒构建成功;经PCR鉴定, UA159-FR的gtfB基因失活株构建成功.结论:成功构建了含有gtfB基因重组片段的重组质粒和S.mutans耐氟菌株UA159-FR的gtfB基因失活株, 可用于gtfB基因功能的研究.
关键词： 变形链球菌耐氟菌株 gtfB基因 重叠延伸聚合酶链反应 同源重组 基因失活
