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兔腮腺腺细胞的体外培养和功能评价
目的:体外培养获取成活率高且保持功能的兔腮腺腺细胞.方法:采用改良DMEM培养液进行兔腮腺腺细胞的原代及传代培养,观察腮腺腺细胞的生长状况:免疫细胞化学法检测细胞中泛角蛋白及α-淀粉酶蛋白和肌动蛋白的表达情况以鉴定细胞来源:检测α-淀粉酶蛋白在不同代次腺细胞中的表达情况,判断其分泌功能.应用SPSS10.0软件包对数据进行t检验.结果:体外培养的兔腮腺腺细胞具有一定的增殖能力,可传3代,存活4周以上;其特异性抗体泛角蛋白及α-淀粉酶蛋白染色为阳性.肌动蛋白染色阴性;不同代次腺细胞α-淀粉酶的表达强度随传代次数的增加而逐渐减弱,原代培养和传代培养第1代的细胞,α-淀粉酶的表达强度较高且可维持一定水平,两者无显著差异(P＜0.05);传代培养第2代的细胞,α-淀粉酶含量明显下降,与前者差异显著(P＜0.05);第3代细胞基本测不到α-淀粉酶的表达.结论:采用改良DMEM培养液体外培养兔腮腺腺细胞.可得到足量的腺细胞.且前2代细胞保持了较强的分泌功能,是选作实验研究的佳阶段.
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藻酸盐诱发的免疫反应对兔腮腺腺细胞的作用
目的:探讨藻酸盐诱发的免疫反应对腮腺腺细胞的作用.方法:采用Alginate-BSA交联物免疫兔,ELISA法检测藻酸盐抗血清效价;实验分5 组:A、空白对照组, B、牛血清白蛋白组, C、藻酸盐组, D、抗藻酸盐血清组和E抗藻酸盐血清+藻酸盐组,分别在1、6、12和24 h采用MTT法检测各组腮腺腺细胞增殖情况.倒置显微镜观察不同组腮腺腺细胞生长、形态和结构变化;扫描电镜观察E组腺细胞超微结构的改变.结果:Alginate-BSA交联物免疫兔约40 d,藻酸盐抗血清的效价达到1∶ 400;二者适宜反应浓度:藻酸盐为40 μg/ml,抗藻酸盐血清的稀释度为1∶ 100;MTT检测结果A、B、C、D、E组在前3 个时间点没有差异,而在24 h时,E组与A、B、C、D组差异显著(P<0.05),说明抗藻酸盐血清和藻酸盐的免疫反应对腺细胞的增殖有显著的抑制.倒置显微镜下在12 h和24 h可观察到E组个别腺细胞表面有破裂,胞质外溢,细胞形态不完整;其它组未见异常.扫描电镜观察E组在6 h即有个别腺细胞胞膜有破裂,呈圆孔形,细胞的轮廓仍清晰完整.12 h可见破裂细胞数增多,且细胞膜上破裂孔、裂也增多变大.24 h可见细胞的形态不完整,有较大范围胞膜破裂,细胞崩解.结论:抗藻酸盐血清和藻酸盐反应对腮腺腺细胞可造成免疫损伤,导致细胞死亡.
