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  • siRNA抑制TGFβ3诱导小鼠腭裂机制的研究

    作者:陈沐;陈亦阳;汪淼;侯劲松;黄洪章

    目的:探讨siRNA抑制TGFβ3诱发腭裂的机制.方法:使用不同剂量(200、400、800pmol)经脂质体LipofectamineTM2000包裹的TGFβ3 StealthTMRNAi于交配后(days post coitum,dpc)12天做孕鼠官腔注射,等体积生理盐水注射作为空白对照.14dpc时取部分胎鼠腭突,RT-PCR及Western印迹检测腭突中TGFβ3、Smad2、BMP2的表达情况.16dpc时再取部分胎鼠腭突,观察腭突融合情况,免疫组织化学及免疫荧光观察胚鼠腭突的TGFβ3、Smad2、BMP2的表达情况.实验数据均以SPSS13.0软件包进行分析,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验.结果:宫腔注射800pmol的StealthTMRNAi,可引起TGFβ3基因mRNA和蛋白表达水平明显降低,400pmol组能显著降低Smad2基因的mRNA和蛋白表达水平,但BMP2的表达情况未受明显影响.20%~60%的实验组小鼠胚胎腭突不能融合,形成腭隐裂,与空白对照组相比,其TGFβ3、Smad2的表达量较低,而BMP2的表达未见显著变化.结论:在12dpc给予小鼠官腔注射TGFβ3 StealthTMRNAi,能有效沉默TGFβ3基因,20% ~60%小鼠胚胎形成腭隐裂,同时Smad2基因表达下调,但对BMP2基因表达无明显影响.

  • 不同时期宫内手术修复腭裂山羊的面中部发育变化研究

    作者:彭喆;刘岩;杨锴;冯国平

    目的 通过观察先天性腭裂山羊模型,研究不同时期宫内修复对山羊面中部发育的影响. 方法 取24只8~12月龄雌性杂交波尔山羊,体重35~55 kg,以配种日期定为孕0d,于孕30 d经B超确认怀孕后随机将实验动物分为5组.取其中20只分别于孕31~42 d肌肉注射左旋毒藜碱(15 mg/d)制备先天性腭裂动物模型;其余4只作为正常对照组不作处理,待其正常生产.20只实验动物模型形成后随机分为实验1、2、3、4组(n=5),前3组分别于孕65、90、120 d采用改良兰氏法对宫内1只胎羊行腭裂修复术;实验4组作为未修复对照组.小羊出生后1个月,采用CT颅面测量技术,测量上颌前磨牙前方的两侧凹陷处间距(posterior premolar morphological measurement,PPMM),及以此线为基准测量上颌骨前点至此线的垂直距离(anterior premolar morphological measurement,APMM),后制作干颅行大体观察. 结果 小羊出生后1个月,实验1组PPMM、APMM与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),与实验4组比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验2组PPMM、APMM与正常对照组、实验4组比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验3组PPMM与正常对照组和实验4组比较差异均有统计学意义(P<0.05),APMM与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但与实验4组比较差异无统计学意义(P>0.05).实验4组的5只腭裂小羊仅存活l~2个月. 结论 对孕65 d胎羊行富内修复腭裂后对面中部发育影响小,越接近孕晚期修复对面中部发育影响越大,但修复手术越早流产风险越高.

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