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重组抗HER2人源化单克隆抗体文献资料
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重组抗HER2人源化单克隆抗体的瞬时表达及其抗肿瘤活性
利用HEK293F细胞瞬时表达重组抗HER2人源化单克隆抗体(rhHER2-mAb),优化转染条件,并初步鉴定纯化后的抗体抗肿瘤活性.分别构建rhHER2-mAb重、轻链表达载体(pCMV-HC和pCMV-LC),采用聚乙烯亚胺(PEI)为转染试剂,共转染重、轻链质粒到HEK293F细胞中进行表达.采用Protein A亲和色谱纯化抗体,以WST-8法检测其体外抗肿瘤效果.经优化后,HEK293F细胞瞬时表达rhHER2-mAb的佳条件为:细胞接种密度4×106 cells/ml,DNA浓度2.0g/106 cells,DNA∶PEI为1∶2,重链∶轻链为1∶1,抗体表达量可达73.0 mg/L,抗体纯度大于98％.rhHER2-mAb对高表达HER2的乳腺癌BT-474细胞抑制率为(72.3±2.0)％,对中表达HER2的乳腺癌SK-BR-3细胞抑制率约(32.1±1.2)％,但对低表达HER2的乳腺癌MCF-7细胞无显著抑制作用.细胞凋亡试验结果表明,相对于对照组,rhHER2-mAb对BT-474细胞的凋亡率约25％,对SK-BR-3细胞则近15％.
