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还原型辅酶Ⅰ文献资料
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用于合成L-2-氨基丁酸基因工程菌的构建
构建了还原型辅酶Ⅰ (NADH)再生与亮氨酸脱氢酶(LDH)偶联的催化体系,合成甲酸脱氢酶(FDH)基因序列片段,连接入pET28a质粒,构建了pFDH-pET28a,转化入Ecoli BL21 (DE3)表达.经IPTG诱导后,FDH粗酶液的酶活力约10u/ml.合成LDH基因序列,连接入pET21a质粒,构建了pLDH-pET21a,将该质粒与pFDH-pET28a共转化入E.coli BL21 (DE3),共表达FDH与LDH,与苏氨酸脱氨酶(TD)共同催化L-2-氨基丁酸的合成.投料量为7 g/100 ml时,该体系产率可达95％.
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还原型辅酶Ⅰ荧光特性的初步观察
目的了解NADH的荧光特性.方法用荧光光度计扫描NADH 340～420 nm范围确定其激发波长,扫描390～560 nm范围确定其发射波长.扫描氧化型辅酶Ⅰ(NAD)标准品激发波长范围及发射波长范围,再于NADH中加入NAD,观察其对NADH的干扰.加入LD液及乳酸反应体系,观察其对NADH的干扰.结果 NADH激发波长为382 nm,发射波长为460 nm.NAD在280～420 nm处无激发波峰,400～500 nm处无发射波峰.NADH中加入NAD后激发波峰有改变.加入LD液后NADH的激发波峰及发射波峰无改变.加入乳酸反应体系后激发波峰有改变.结论利用NADH的荧光特性,在检测中只需固定其发射波长,通过观察NADH荧光强度的变化,就可以对一些微量物质进行检测,可将其测定灵敏度提高2～3个数量级.
