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非结构蛋白-3文献资料
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庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究
目的:利用Bac-to-Bac HT杆状病毒系统在Sf 9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒(HGV)NS3蛋白,并对表达产物的免疫原性进行研究.方法:将HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体pFastBac HTa ,转化DH10Bac感受态细胞,37℃振荡培养4 h使发生转座,用抗生素平皿筛选重组bacmid. 脂质体介导转染Sf 9昆虫细胞,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液,将上清液再次感染Sf 9细胞以大量表达HGV NS3重组蛋白.利用SDS-PAGE 和Western-blotting 方法分析重组蛋白.结果:SDS-PAGE分析发现表达产物在Mr 43 81 0处有一条明显的蛋白带,占细胞总蛋白量的30%以上;应用Ni-NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白;Western-blotting显示该抗原可与HGV RNA阳性血清发生特异反应. 结论:获得了昆虫细胞内表达的HGV NS3重组蛋白,并证明该蛋白有可能用于HG V 感染的抗体检测.
