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免疫性内耳病模型的建立及地塞米松圆窗和全身给药的疗效
目的 建立免疫性内耳病模型,并初步比较地塞米松圆窗局部给药和全身给药治疗的效果.方法 先用钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)加完全弗氏佐剂在豚鼠背部多点皮内注射,2周后用KLH加不完全弗氏佐剂加强,同日通过手术将浸满KLH的小块明胶海绵置于圆窗上制作免疫诱导的内耳病模型.在此基础上使用微渗透泵(同时设PBS对照组)圆窗给药, 以腹腔注射全身给药治疗免疫性内耳病,给药前后听性脑干反应(ABR)测试比较治疗效果.结果 ①动物模型ABR听阈:6只对照组豚鼠无明显听力损失,39只实验组豚鼠听力损失在10 dB以上的有22只;②治疗效果比较:17只听力损失≥15 dB的豚鼠模型随机分为三组:圆窗局部给药6只动物,治疗全部有效,ABR听阈平均下降13.3 dB;全身给药6只动物,4只有效, ABR听阈平均下降13.7 dB;PBS组全部无效.结论 KLH经圆窗诱导的免疫性内耳病模型的成功率较高;地塞米松跨圆窗给药的有效性不亚于全身给药.
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免疫性内耳病模型的建立及其内耳干扰素-γ的表达
目的:建立免疫性内耳病(IMIED)模型,并检测内耳干扰素-γ(IFN-γ)表达的变化情况.方法:将20只豚鼠按配对设计方法分为实验组和对照组.实验组采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,对照组用PBS代替KLH免疫豚鼠;观察血清中特异性KLH抗体水平、听觉功能及内耳病理形态变化,并行酶免疫组化试验观察内耳IFN-γ的表达.结果:实验组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值差异有统计学意义(P＜0.05),免疫后实验组有7只动物(12耳)出现听损,且血清中特异性KLH抗体水平较免疫前明显升高(P＜0.05);对照组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平的差异均无统计学意义(P＞0.05);免疫后实验组ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平均高于对照组(P＜0.05).实验组免疫后内耳组织中有炎症细胞浸润,部分豚鼠内耳有迷路积水.对照组豚鼠内耳组织中无明显IFN-γ表达,实验组IFN-γ表达主要分布在血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节、Corti器及蜗轴小血管周围.结论:在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,诱导并造成IMIED模型的成功率较高.正常豚鼠内耳中几乎没有IFN-γ表达,而在IMIED豚鼠内耳中IFN-γ有显著表达,提示IMIED发生发展可能与IFN-γ表达有关.
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内耳注入携带 IL -4基因的骨髓间充质干细胞对豚鼠免疫性内耳病基因治疗的研究
目的：研究内耳局部植入白细胞介素4（IL -4）基因修饰骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesen-chymal stem cells ，BMSCs）对免疫性内耳病豚鼠内耳病理损伤和听功能的调节与治疗作用。方法采用钥孔嘁血蓝蛋白（KLH）抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫，制成豚鼠免疫性内耳病模型55只，分为五组：A组（BMSCs载体组）、B组（BM SCs空载体对照组）、C组（重组慢病毒IL -4基因组）、D组（慢病毒空载体对照组）及E组（模拟手术对照组），每组11只，各组均将相应的悬液20μl[BMSCs悬液中含BMSCs（1．5～2．0）×106，慢病毒浓缩液浓度为0．5×108 pfu]经鼓阶开窗植入内耳。采用免疫荧光组织化学试验法、免疫酶组织化学试验法观察IL -4基因产物在内耳组织结构中的分布和表达情况，酶联免疫吸附试验观察血清抗KLH特异性抗体水平，ABR测试听功能变化。结果与免疫前相比，免疫后A、B、C组ABR波Ⅲ阈值不同程度降低，A组阈值降低更明显，差异有统计学意义（P＜0．05）；免疫组织化学染色显示BMSCs荧光反应阳性细胞主要分布在鼓阶、前庭阶；内耳光镜观察A、B、C组仅在鼓阶内有絮状物，注射部位有少量红细胞和白细胞，D、E组可见不同程度的膜迷路积水，螺旋神经节和蜗轴小血管周围有单个核细胞浸润。结论重组IL -4基因的慢病毒载体可在体外成功转染BM SCs ，经鼓阶途径植入内耳后可在内耳迁移并产生基因产物IL -4，可明显减轻免疫性内耳病动物的内耳免疫炎性反应和听功能损伤，而BMSCs可以作为细胞载体把携带有目的基因的治疗因子迁移到损伤部位而发挥治疗作用。
