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耐热植酸酶文献资料
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耐热植酸酶基因phyA的克隆及新型表达载体的构建
目的克隆烟曲霉耐热植酸酶基因,构建分泌性的真核表达质粒,以获取耐热的基因工程植酸酶.方法提取烟曲霉菌的基因组,以此为模板PCR扩增成熟肽编码序列,双酶切后与包含黑曲霉葡萄糖淀粉酶启动子和基因片断的真核表达载体pYG 1.2相连接,转化入大肠杆菌DH5α,从转化菌株中提取质粒进行序列测定和分析.结果 PCR扩增出1 326 bp的植酸酶编码序列,插入pYG 1.2质粒中,构建了重组质粒,重复实验结果表明,该植酸酶基因序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列有2个碱基的差异,编码的蛋白质序列有99.8%的同源性.结论成功构建了用于黑曲霉菌真核表达耐热植酸酶的重组质粒.
