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中药药物性口罩的制备及其对流感病毒H1N1的抑制作用
目的:制备不同组方的中药药物性口罩,并评价其对流感病毒H1N1的抑制作用.方法:组方1(射干、甘草)与组方2(金银花、甘草)分别乙醇提取,以提取液浸泡纯棉脱脂纱布口罩2h,分别制备1号、2号口罩,烘干备用.用制备药物性口罩的原液作用于流感病毒感染的犬肾细胞(MDCK),取细胞上清液进行血凝试验,比较各组细胞上清液的血凝效价,Real-time PCR法测定细胞内流感病毒血凝素(HA)基因的mRNA表达;将流感病毒H1N1液分别过滤药物性口罩,收集口罩滤液,检测滤液中流感病毒HA的效价.结果:组方1作用于流感病毒感染的MDCK细胞后,上清液的血凝效价由210降为26,组方2的血凝效价由210下降为25;与模型组比较,药物组细胞内流感病毒HA基因的mRNA表达量均明显减少(P＜0.05).1号口罩过滤流感病毒H1N1液后,HA的效价由2-12下降为2-5,2号口罩过滤后的效价由2-12下降为2-6.结论:中药组方醇提液可有效抑制流感病毒在MDCK内RNA的复制;中药药物性口罩能够有效破坏流感病毒包膜上的血凝素,可有效阻断流感病毒的传染.
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MDCK细胞缺氧模型的建立及机制研究
目的：建立犬肾细胞（Madin－Darby canine kidney， MDCK）缺氧模型，进一步探讨丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）在缺氧性细胞损伤中的活性改变。方法将MDCK细胞置于体积分数为5％ CO2和95％N2的有机玻璃调节性密闭容器中分别培养24、36、48、72、84 h，MTT实验检测细胞的存活力，蛋白免疫印迹法（ Western blot）检测JNK（c－Jun NH2 terminal protein kinase）和p38 MAPK的磷酸化活性。结果 MDCK细胞缺氧24、36、48、72、84 h后，与正常对照组相比，MTT D值均明显下降（P＜0．01）。MDCK细胞缺氧后，JNK和p38 MAPK的磷酸化水平增高。结论此方法可以成功建立操作简便、有效的MDCK细胞缺氧模型，且是通过激活JNK、p38 MAPK引起缺氧性细胞损伤。
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高原地区流感病毒培养的条件优化
目的探索高原地区流感病毒在犬肾细胞（MDCK）上的佳培养条件，提高流感病毒的分离效果。方法将原始标本分别接种于 MDCK细胞，通过比较CO2百分浓度（5％，4.8％，4.6％，4.4％，4.2％），TPCK-胰酶浓度（1，2，3，4，5，6，8，10μg／ml），接种量（100，200，300，400，500μl），培养时间（48，72，96，120，144 h），接种方法（吸附接种，直接接种），培养容器（细胞瓶，6孔板）对流感病毒的影响，确定佳培养条件，对分离的各型病毒用红细胞凝集（HA）检测病毒滴度。结果通过病毒血凝素滴度结果比较，4.4％ CO2与4.6％ CO2，2μg／ml TPCK-胰酶，300μl与400μl的接种量、吸附接种、72 h～96 h的培养时间、6孔板收获的病毒血凝素滴度高。结论在高原地区实验室建立了 MDCK细胞培养流感病毒的优条件。
