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10月龄淀粉样前体蛋白和早老素双转基因(APP/PS-Tg)小鼠相关指标检测
目的 观察10月龄淀粉样前体蛋白(APP)和早老素(PS)双转基因(APP/PS-Tg)小鼠的各种病理学检测指标,为后续阿尔茨海默病(AD)研究提供参考.方法 ①用自主活动试验和水迷宫试验观察行为学改变;②用HE染色、硫代黄素S染色和TUNEL荧光染色观察脑组织病理学改变、纤维状Aβ沉积和细胞凋亡;③用多重荧光检测系统对血清和脑组织匀浆进行与免疫调节和信号通路有关的细胞因子检测.结果 ①行为学试验中,10月龄APP/PS-Tg小鼠自主活动次数与阴性对照比较差异无统计学意义,但Morris水迷宫试验显示APP/PS-Tg小鼠学习认知的时间(即潜伏期)落后于阴性对照组.②脑组织切片HE染色,可见APP/PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在老年斑病变.老年斑大小不一,部分老年斑周围可见不典型的小胶质细胞反应,而阴性对照无此病理改变.用硫代黄素S染色,在激光共聚焦显微镜下用波长429 nm观察,APP/PS-Tg小鼠大脑皮层和海马区可见散在颗粒状绿色荧光,荧光颗粒大小不一,主要分布在大脑皮层,海马区数量较少.阴性对照小鼠大脑皮层和海马区未发现有荧光颗粒.用TUNEL试验检测脑内细胞凋亡情况,在激光共聚焦显微镜下在520士20 nm的荧光下观察绿色荧光标记的凋亡细胞.APP/PS-Tg小鼠与阴性对照比较,差异有极显著统计学意义(P≤0.01).③血清细胞因子检测,10月龄APP/PS-Tg小鼠与阴性对照组比较,白介素(IL)-2、IL-10、IL-12、IL-12、IL-17α、肿瘤坏死因子(TNF)-α和转化生长因子(TGF)β3含量明显下降,其中IL-2、IL-10、IL-17α和TNFα含量均有显著下降(P≤0.01);用脑组织匀浆检测细胞因子,APP/PS-Tg小鼠IL-2、IL-17α、TNF-α和TGFβ1,2,3的含量较阴性对照高,但差异无统计学意义(P≥0.05).结论 在APP/PS-Tg小鼠的评价指标中,Morris水迷宫试验是一个敏感可靠的行为学试验方法;脑组织切片HE染色、硫代黄素S染色和TUNEL试验均简单易行,可从不同角度检测APP/PS-Tg小鼠的脑内病理改变;血清和脑组织匀浆细胞因子的检测显示有些细胞因子可能参与阿尔茨海默病的发病过程.
