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色瑞替尼对精子制动作用和质膜损伤的体外研究
目的 研究前期筛选到的精子功能调节候选化合物色瑞替尼的体外精子制动作用和机制.方法 计算机辅助精液分析(computer assistant sperm analysis,CASA)系统测定色瑞替尼对人和小鼠高活力精子20 s内的制动效果;低渗膨胀(hypo-osmotic swelling,HOS)实验、SYBR-14/PI染色探究精子质膜的完整性;用电镜观察色瑞替尼处理后精子质膜的变化;用色瑞替尼处理VK2/E6E7、End1/E6E7、Ect1/E6E7细胞,CCK-8及荧光染色法检测细胞活性.结果 色瑞替尼对于(5～10)×106/mL人精子的20 s瞬间杀精小有效浓度(minimal effective concentration,MEC)为(74.87±31.46) μmol/L,而相同条件下测到的杀精药物壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)的MEC为(219.75±20.89) μmol/L.CASA系统分析表明,色瑞替尼对精子的制动作用有时间-浓度依赖关系.HOS实验及SYBR-14/PI染色法验证色瑞替尼对精子质膜有一定的损伤,并可致精子死亡.电镜显示色瑞替尼处理后的精子质膜破裂,头尾分离较多.色瑞替尼对上皮细胞有一定损伤.结论 色瑞替尼对精子有快速的制动作用,具有潜在的避孕药效.
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激光辅助制动对精子核DNA的影响
目的: 研究激光辅助制动精子是否引起精子核DNA损伤.方法: 23例行体外受精(IVF)的男性精液标本,上游法处理后用0.45 ms脉冲激光照射精子尾部制动精子.采用末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)两种方法分别检测激光辅助制动处理前后阳性精子百分率.结果: TUNEL法检测激光辅助制动处理前后阳性精子的百分率分别为(1.32±0.61)%、(1.41±0.51)%,差异无显著性(P＞0.05);SCGE法检测处理前后阳性精子百分率分别为(1.59±0.70)%、(1.83±0.68)%,差异亦无显著性(P＞0.05).结论: 激光照射精子尾部辅助制动精子对精子核DNA无明显损伤.
关键词： 精子制动 激光 DNA损伤 末端转移酶介导的dUTP末端标记法 单细胞凝胶电泳 -
降低聚乙烯吡咯烷酮浓度对卵胞浆内单精子显微注射效果的影响
目的:探讨卵胞浆内单精子注射(ICSI)操作中,降低聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对ICSI效果的影响.方法:将132例160个周期接受ICSI治疗的患者所获1 549个MⅡ卵随机1:1分配.分别采用在舍7%和3.5%PVP(对有A、B级活动精子的周期)或者在3.5%和不含PVP(对仅有C、D级活动精子的周期)操作液中制动的精子行ICSI,比较ICSI效果.结果:PVP浓度为3.5%时,ICSI卵的受精率和卵裂率分别为80.12%和96.78%.与PVP浓度为7%时的受精率(79.84%)和卵裂率(96.89%)比较差异无显著性(P0.05).但采用3.5%PVP制动精子行ICSI获得的优质胚胎率达77.76%,高于7%PVP制动时的71.43%,差异有显著性(P<0.05).在不舍PVP操作液中制动精子后行ICSI,卵子的受精率、卵裂率及优质胚胎率均与在3.5%PVP制动精子行ICSI差异无显著性(P0.05).结论:对于活动力良好的精子,降低精子制动液的PVP浓度至3.5%,可提高ICSI的优质胚胎率.精子活动力差时,进一步降低PVP浓度对ICSI效果无明显影响.
