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活化的大鼠肝星状细胞赖氨酸乙酰化蛋白质组学分析
目的 对活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)进行赖氨酸乙酰化(lysine acetylation,Kac)蛋白质组学分析.方法 于清洁级雄性SD大鼠中提取并培养原代HSCs,分为对照组(培养＜2天)和活化组(培养≥10天).对两组细胞进行裂解,iTRAQ/TMT标记后的成对肽段样品采用乙酰化抗体进行亲和富集,应用高分辨率LC-MS/MS技术进行质谱鉴定.后对质谱鉴定的乙酰化蛋白质进行生物信息学分析.结果 应用LC-MS/MS技术、GO注释和KEGG通路等生物信息学分析方法,共确定309种蛋白质中的470个Kac位点.对其中150个蛋白质的231个Kac位点进行肽段定量研究,与静息的HSCs相比,在活化的HSCs中有109个蛋白质的乙酰化肽段数目增加,18个蛋白质的乙酰化肽段数目减少,并涉及多种GO分类和KEGG通路.乙酰化蛋白质广泛定位于胞质(38.1％)和线粒体(30.2％).基于GO富集的聚类分析显示Kac位点主要与能量代谢相关;基于KEGG通路的聚类分析显示这些蛋白质广泛参与三羧酸循环,与线粒体关系密切.结论 首次对HSCs的Kac蛋白质进行质谱分析,并对发生乙酰化的蛋白质位点进行量化鉴定,为揭示蛋白质乙酰化在HSCs活化过程中的作用提供了一定的基础,并为抑制肝纤维化提供了潜在的分子靶标.
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胆囊癌组织中蛋白赖氨酸乙酰化的变化及临床意义
目的:探讨蛋白赖氨酸乙酰化在胆囊癌组织中的变化情况.方法:采用Western免疫印迹法,分别检测30例胆囊癌组织和20例慢性胆囊炎组织中蛋白赖氨酸乙酰化的变化.结果:与慢性胆囊炎组织相比,胆囊癌组织中的蛋白赖氨酸乙酰化显著增加(P＜0.01),乙酰化的显著增加主要发生在相对分子质量为10 000～36 000的蛋白.结论:利用赖氨酸乙酰化单克隆抗体特异性能够检测到胆囊组织蛋白的赖氨酸乙酰化,且相对分子质量为10 000 ～36 000蛋白的赖氨酸乙酰化增加显著.
