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原代小鼠气道上皮细胞文献资料
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水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响
目的 探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制.方法 原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞.蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异.结果 气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性.PMA 20ng/mL刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5 AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P＜0.05),两者差异有统计学意义.PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌.原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化.结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌.
