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重组新生血管生成抑制因子K5文献资料
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人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定
目的构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV304和MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5 cDNA,所得的目的片段与真核表达载体pcDNA3重组,构建重组质粒pcDNA3K5,脂质体法将其转染MDA-MB-231,G418筛选阳性克隆,PCR鉴定,RT-PCR和Western blot检测K5的表达.将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞,MTT法检测其增殖情况,并用MTT法检测转染pcDNA3K5对MDA-MB-231细胞增殖的影响.结果构建的重组质粒pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确,将其转染MDA-MB-231后挑取的阳性克隆有3个经PCR鉴定正确,并经RT-PCR和Western blot检测证实K5的表达.阳性克隆的培养上清作用于ECV304细胞后,其存活率降低;转染pcDNA3K5对MDA-MB-231细胞增殖无明显影响.结论应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5 cDNA转染MDA-MB-231细胞后,其分泌产生的有生物学活性的K5,呈现对ECV304细胞增殖的抑制作用,而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响.
关键词： 重组新生血管生成抑制因子K5 乳腺癌 基因治疗
