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可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
目的 利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白.方法 首先将可溶性HLA-A·0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa, 形成重组载体pFHT-sHLA-A·0201-IgGFc.将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌, sHLA-A·0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中.抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9, 72 h收集病毒上清.再将病毒上清感染Sf9细胞, 96 h收集细胞并裂解, SDS-PAGE观察其表达.细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象.结果 融合蛋白不仅与HLA Ⅰ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合.结论 所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象.
关键词： sHLA-A2 IgGFc 融合蛋白 杆状病毒-昆虫细胞表达体系
