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miR-200b-3p与DNA甲基转移酶-3a在骨关节炎软骨 细胞中的表达及作用机制
目的 探讨miR-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 RT-PCR法检测miR-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证miR-200b-3p和DNMT3A之间的靶向关系;构建过表达的miR-200b-3p和DNMT3A真核细胞载体;qRT-PCR和western bolt检测MMPs和COLⅡmRNA及蛋白质在稳定转染的软骨细胞中的表达;通过细胞活力测定(MTS法)、团块培养、Hoechst 33342染色法评估细胞的增殖与凋亡情况.结果 qRT-PCR法及westernbolt结果显示,miR-200b-3p和COLⅡ在骨关节炎软骨组织中呈低表达,而DNMT3A和MMPs呈高表达;双荧光素酶和western bolt证实miR-200b-3p和DNMT3A之间存在靶向关系;MTS法、团块培养及Hoechst 33342染色法结果证实,在miR-200b-3p过表达的软骨细胞中,DNMT3A和MMPs的表达水平明显下调,COLⅡ的表达水平则明显上调,且细胞的生存能力增强,凋亡率降低(P均<0.05);在过表达DNMT3A的软骨细胞中,MMPs的表达水平明显上调,COLⅡ的表达水平明显下调,且细胞的生存能力减弱,凋亡率增加(P均<0.05).结论 miR-200b-3p可以抑制MMPs分泌和促进COLⅡ合成,并且可以通过抑制DNMT3A的表达来增强骨关节炎软骨细胞的生长与增殖.
关键词： 骨关节炎 软骨细胞 miR-200b-3p DNA甲基转移酶-3a -
大鼠心肌梗死后与FSTL1和miRNA-200的表达及其机制
目的 探讨SD大鼠急性心肌梗死(AMI)与血清卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)及其相关miR-200b-3p的表达情况.方法 20只SD大鼠分为AMI组和Sham组,AMI组结扎大鼠左冠状动脉前降支,而Sham组不结扎,术后1d收集两组大鼠静脉血和心脏组织,采用ELISA法检测大鼠血浆cTnI和FSTL1的表达,用qRT-PCR法检测大鼠血浆、组织rno-miR-200b-3p和组织FSTL1的表达,采用Western blot法检测组织FSTL1的表达.结果 AMI组大鼠心肌梗死后1d血浆FSTL1的表达较Sham组明显升高(P＜0.05),其ROC曲线AUC为1.000(P＜0.05);而AMI组大鼠心肌梗死后1d心脏组织中FSTL1的表达无论在基因水平还是蛋白水平都较Sham组明显降低(P＜0.05);AMI组大鼠术后1d血浆中rno-miR-200b-3p的表达较Sham组明显降低(P＜0.05),而AMI组大鼠术后1d心脏组织中rno-miR-200b-3p较Sham组明显升高(P＜0.05).结论 FSTL1和rno-miR-200b-3p都可能与大鼠AMI有关,FSTL1可以作为AMI的心肌标志物,rno-miR-200b-3p可能通过调控FSTL1的表达而参与AMI发病机制的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡等过程.
关键词： 血清卵泡抑素样蛋白1 急性心肌梗死 miR-200b-3p 生物标志物
