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7-脱氢胆固醇文献资料
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高效液相色谱法测定血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性的建立
目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性的方法,观察LCAT活性与动脉粥样硬化性心血管病(CVD)传统危险因素的关系.方法 选用7-脱氢胆固醇和1,2-二癸酰基甘油-3-磷酸(10∶0 PC)作为LCAT的反应底物,加入LCAT激活肽(LAP642),制备脂质体;在冰水浴中将500μL脂质体与10μL血清混合,37℃温育1h;提取脂质,HPLC测定反应后7-脱氢胆固醇及其酯之比,计算LCAT活性.用所建方法测定120例健康志愿者血清的LCAT活性,分析其与CVD危险因素的关系.结果 7-脱氢胆固醇、10∶0 PC(物质的量的比为1∶8.5)与LAP642组成的脂质体制备简单、性质稳定.当温育时间0～8h、血清量0～ 20 μL时,LCAT活性与变量线性相关;平均批内不精密度(CV)和总CV分别小于1.76％、3.11％.方法比对结果显示,所建方法与ELISA测定的LCAT质量和内源底物法测定的LCAT活性显著正相关(P＜0.01).120例样本LCAT活性与体质量指数(BMI)、三酰甘油(TG)等呈正相关(P＜0.05);与载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)(P＜0.05)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) (P ＜0.01)等呈负相关.结论 建立了HPLC测定LCAT活性的外源底物法,所建方法简便、精密、可靠,结果不受反应底物影响,为脂代谢机制研究和CVD危险分析提供了新的方法学基础.
关键词： 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 心血管病 高效液相色谱 7-脱氢胆固醇
