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内标系统文献资料
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影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析
目的 在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度.方法 针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体(PD)含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1 μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度.结果 中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30～33之间;10、8、5、2、1 μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×104、5×104、5×104、5×105、5×107 IU/mL;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×103 IU/mL,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×102 IU/mL;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×105、5×104、5×103、5×103 IU/mL.结论 在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有高的灵敏度.
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TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展
TaqMan探针法实时荧光定量PCR因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用,内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度,增加了其可靠性和实用性.然而,这一技术也因为假阴性和假阳性问题存在着改进的空间.本文从TaqMan探针法的简介、研究进展以及应用前景展开综述.
