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液相色谱技术在血清蛋白质组学研究中的应用
蛋白质组(proteome)是指细胞在指定的时间和空间下表达的所有蛋白质、蛋白质亚型以及翻译后修饰的蛋白质形式.通过转录、翻译、修饰(水解、糖基化、磷酸化等),基因可以产生不同的蛋白质,而且在健康和疾病状态下细胞或组织表达的蛋白质不同[1].
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胃癌差异表达蛋白的蛋白质组学分析
目的：筛选与鉴定胃癌差异表达蛋白质分子。方法采用定量蛋白组学方法，通过同位素iTRAQ标记胃癌与正常胃黏膜组织总蛋白，然后用强阳离子交换/反相液相色谱( SCX/nanoHPLC)进行电喷雾串联质谱分析( ESI-MS/MS)，获得两组样本的多肽及相对丰度信息，通过数据库搜索与比对，鉴定差异表达蛋白质。结果共鉴定出319个蛋白质，其中表达差异在2倍以上的88个，在胃癌中呈高表达的12个、呈低表达的76个。按蛋白质功能分为七大类：细胞骨架蛋白、分子伴侣、信号传导、生物代谢、凋亡，蛋白质合成与代谢类及其他蛋白质。结论成功筛选了胃癌差异表达蛋白质分子，这些蛋白质的表达改变，可能参与了胃癌的发生和发展。
关键词： 胃癌 iTRAQTM同位素标记相对和绝对定量 多维液相色谱 串联质谱 -
蛋白组学研究中胰腺组织匀浆化方法的建立
目的:通过不同匀浆化方法提取大鼠胰腺组织总蛋白,建立胰腺组织匀浆化的标准方法.方法:用液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法进行高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法进行匀浆化胰腺组织,总蛋白提取试剂盒提取胰腺组织总蛋白,测量蛋白浓度并用体积排阻色谱(SEC)分离后分别进行基质辅助激光电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)做蛋白全谱.结果:液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法,高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法总蛋白提取量分别为每0.1g胰腺组织:(6.7±0.5)mg、(6.9±0.2)mg、(5.4±0.2)mg、(5.6±0.2)mg,MALDI-TOF-MS蛋白全谱的谱峰数分别为304.2±22.3、331.6±30.5、263.8±19.7、289.8±12.2个.结论:液氮研磨配合超声破碎法与其他3种方法相比具有匀浆化彻底、蛋白不易变性等优点.
关键词： 蛋白质组学 多维液相色谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 匀浆化
