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BSP siRNA 的构建及其对成骨样细胞株MC3T3-E1相关基因表达的影响
目的 构建BSP干扰表达载体,有效沉默小鼠成骨样细胞MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,研究其对MC3T3-E1 Subclone 14增殖分化过程中OCN等成骨相关基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对BSP基因mRNA序列设计四条可能的小干扰RNA(siRNA),将这四条小干扰RNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的BSP siRNA 表达载体pGPU6/GFP/Neo-siBSP-1、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-2、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-3、pGPU6/GFP/Neo-siBSP-4通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染MC3T3-E1 Subclone 14细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,以RT-PCR 检测BSP和OCN等成骨相关基因mRNA的表达.结果 ①成功构建四条正确的BSP siRNA 表达载体;②成功筛选出一条对BSP有明显抑制作用的siRNA干扰载体,阻断BSP表达后,成骨相关基因cbfa1和OCN的表达均受到明显抑制.结论 构建的BSP siRNA 表达载体可以有效抑制MC3T3-E1 Subclone 14细胞的BSP基因表达,同时抑制相关基因cbfa1和OCN的表达,从而影响该成骨细胞形态与功能,为骨转移等相关疾病的治疗提供了一定的实验基础.
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β3GalT7基因的小干扰RNA筛选及其表达载体构建
目的: 以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型.方法: 通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带有荧光标记的RNA oligo进一步验证其有效性,进而构建该基因的RNA干扰表达载体建立其下调表达模型.结果: 成功筛选到β3GalT7基因的有效小干扰siRNA, 并进一步成功构建β3GalT7的RNA干扰真核表达载体.结论: 成功构建β3GalT7的真核干扰表达载体,继而可以获得β3GalT7表达受抑制的人胃癌细胞SGC7901克隆,为研究该基因在肿瘤发生发展中的作用提供实验模型.
关键词： 人β1 3-半乳糖基转移酶7基因 小干扰RNA RNA干扰表达载体
