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糖尿病肾病 "REKEN cDNA 0610006H10"基因文献资料
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糖尿病肾病小鼠新相关基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
目的:构建小鼠"REKEN cDNA 0610006H10"基因表达载体pPRO-6AB,了解此表达载体在大肠杆菌中表达的情况.方法:从克隆有"REKEN cDNA 0610006H10"基因cDNA的载体pUCm-6AB中切取长约1.1 kb的"REKEN cDNA 0610006H10"基因cDNA,将它克隆到原核表达载体pPROTet.E的多克隆位点中.以限制性内切酶酶切分析的方法对重组克隆进行初步鉴定,以测序法对重组子进行验证.在确证得到了预期的表达载体pPRO-6AB后,以氯化钙转染法将表达载体导入大肠杆菌BL21PRO中作蛋白表达分析.蛋白分析方法采用SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,所用胶浓度为10%,交联度为3.3%.电泳结束后利用考马丝亮蓝染色法进行染色.结果:得到了预期的"REKEN cDNA 0610006H10"基因原核表达载体pPRO-6AB;"REKEN cDNA 0610006H10"基因成功地在大肠杆菌中实现了表达.结论:我们成功地构建了小鼠"REKEN cDNA 0610006H10"基因表达载体pPRO-6AB,在大肠杆菌中成功地进行了"REKEN cDNA 0610006H10"基因的表达,从而为进一步研究"REKEN cDNA 0610006H10"基因编码蛋白的结构和功能,探讨"REKEN cDNA 0610006H10"基因在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用创造了条件.
