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miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖
目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制. 方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3端非编码区(UTR).将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响. 结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12 ±-0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P＜0.05).荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR.转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P＜0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P＞0.05).MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强.转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)％和(82.10 ±6.35)％(P＜0.05)、(49.34±2.37)％和(70.10 ±5.80)％ (P ＜0.05). 结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖.
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沉默PKM2增强藤黄酸诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的敏感性
目的:研究沉默丙酮酸激酶M2型(PKM2)对藤黄酸(GA)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制. 方法:设计并合成针对PKM2的3条特异性siRNA及阴性对照siRNA(si-NC).利用脂质体将PKM2 siRNA和si-NC转染至人前列腺癌PC3细胞并检测PKM2 siRNA的沉默效率.MTT和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双重染色法分别检测沉默PKM2后GA对PC3细胞生长活性和凋亡的影响.采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测c-myc和cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平. 结果:与si-NC组比较,3条PKM2 siRNA都能够有效下调PKM2的mRNA和蛋白表达水平,其中PKM2 siRNA-1的沉默效率高.转染PKM2siRNA-1 24 h后,PC3细胞中PKM2mRNA和蛋白表达水平分别下调70％和85％(P＜0.05).转染PKM2 siRNA-1后给予0.5 μmoL/L的GA处理24 h,PC3细胞生长活性明显受到抑制(对照组的68％)且凋亡诱导增加,而且c-myc和cyclin D1基因的mRNA和蛋白的表达水平显著下调(c-myc分别为对照组的50％和35％；cyclin D1分别为对照组的60％和20％,P＜0.05). 结论:抑制PKM2能够提高GA诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的敏感性,PKM2可能成为GA治疗前列腺癌的有效增敏靶点.
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TuM2-PK、CEA、ADA和LDH在鉴别诊断恶性胸腔积液中的价值
目的 探讨胸腔积液癌胚抗原(CEA)、丙酮酸激酶M2型(TuM2-PK)、腺苷脱氨酶(ADA)和乳酸脱氢酶(LDH)在鉴别诊断恶性胸腔积液中的价值.方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测恶性胸腔积液36例、良性胸腔积液38例中的CEA及TuM2-PK含量.采用酶法进行ADA、LDH含量测定.结果 (1)恶性组胸腔积液中CEA、TuM2-PK水平显著高于良性组(P<0.01).(2)恶性组胸腔积液中ADA水平低于良性组(P<0.05).(3)恶性组胸腔积液中LDH水平与良性组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 胸腔积液TuM2-PK、CEA和ADA联合检测有助于恶性胸腔积液临床诊断.
