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多瘤病毒中间T基因文献资料
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条件性血管瘤转基因小鼠模型的建立
目的：采用条件性转基因策略构建小鼠血管瘤动物模型，并对其表型进行鉴定。方法：构建血管内皮细胞特异性表达启动子Tie2驱动的鼠多瘤病毒中间T基因（ PyMT）表达质粒（ pTie2?PyMT），采用DNA显微注射方法，将血管内皮特异性表达的PyMT目的基因导入供体C57BL／6J小鼠的雄原核中，再移植到假孕鼠的输卵管中，产生转基因首建鼠。 PCR方法检测目的基因整合情况，检查转基因鼠基因型，观察转基因鼠表型，对于转基因鼠出现的新生物进行组织学及免疫组织化学检测。采用GraphPad Prism 5．0软件包对实验数据进行统计学分析。结果：经测序分析证实，pTie2?PyMT质粒中PyMT、Tie2启动子和Tie2增强子序列等组成元件被正确克隆、连接，且阅读框正确。出生小鼠基因型经PCR鉴定证实，阳性的转基因小鼠均出现血管瘤样新生物表型。血管瘤样新生物主要表达部位在小鼠的耳、舌、皮肤、黏膜、肝等部位，组织学检查证实为血管瘤样病变，免疫组织化学方法证实新生物的内皮细胞表达PyMT蛋白及血管内皮标志物CD31。结论：Tie2启动子驱动下的PyMT基因可以在小鼠体内诱发血管瘤，该模型鼠可用于血管瘤发病机制的研究。条件控制下的转基因技术是一种有效的建立血管瘤动物模型的方法。
