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抗菌肽Plectasin的新型体外折叠方法与活性鉴定
在体外条件下,通过体外折叠体系折叠化学合成的Plectasin,经过HPLC纯化及圆二色谱仪(CD)进行结构鉴定.以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RSA),耐万古霉素肠球菌(VREF)及耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)为实验菌株,用微量肉汤稀释法测定Plectasin对耐药菌的小抑菌浓度(MIC).结果:经体外折叠的Plectasin通过HPLC进行纯化,样品峰约在44.8 min出现,回收率约15％;圆二色谱鉴定显示,折叠后的Plectasin分子结构与折叠前不同,和天然构象类似;折叠活化的Plectasin对MRSA、VREF及PRSP的MIC分别为28,14,28 μg/mL.通过体外折叠体系折叠化学合成的Plectasin抗菌肽,能使其获得与天然构象相当的抗菌活性.
关键词： 抗菌肽Plectasin 化学合成 体外折叠 高效液相 圆二色谱 -
预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠
目的: 提高可溶性HLA-A2-肽复合物体外折叠效率.方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC).通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽(Try369-377)存在的情况下, 于pH 6.6 的折叠缓冲体系中稀释复性.利用Western blot及ELISA检测折叠产物.结果: 折叠复合物中主要含有HLA-A2-抗原肽复合物和β2m, 较少含有HC聚合体; 折叠效率较传统方法提高2.5倍.结论: 通过与传统方法作比较, 证实此法折叠效率比传统方法高, 为进一步HLA-肽四聚体及人工抗原提呈细胞的制备可提供足够可溶性的HLA-A2-肽单体.
关键词： HLA-A2-抗原肽复合物 体外折叠 二硫键形成 -
大分子拥挤及其对蛋白质折叠的影响
大分子拥挤现象在过去的几十年中,对于蛋白质体外折叠的大量研究,为理解细胞内新生肽链如何折叠成熟为具有一定功能的蛋白质以及克服大多数重组蛋白在重新折叠的过程中形成包涵体提供了充足的依据.
