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多元醇对全人源抗VEGF165单克隆抗体构象稳定性及胶体稳定性的影响
通过研究4种多元醇(海藻糖、甘露醇、山梨糖和蔗糖)对全人源抗VEGF165单克隆抗体(HVAB)构象及胶体稳定性的影响,筛选出优的HVAB稳定剂并探讨多元醇稳定抗体的作用机制.该研究运用差示荧光扫描法(Differential scanning fluorimetry,DSF)判断多元醇对抗体热稳定性的影响;采用圆二色光谱(Circular dichroism,CD)和二阶导数色氨酸荧光光谱探讨多元醇对抗体构象稳定性的影响;聚乙二醇诱导抗体发生液-液相分离现象判断多元醇对抗体胶体稳定性的影响.结果表明4种多元醇均能提高抗体的热稳定性及胶体稳定性;多元醇作为辅料添加到溶液中会引起抗体构象发生变化,圆二色谱结果显示HVAB二级结构发生变化,但仍然以β-折叠为主;海藻糖和甘露醇引起HVAB发生去折叠,并未引起抗体发生聚集或片段化,同时提高了抗体的胶体稳定性;山梨糖提高抗体Tm值效果明显,在稳定抗体胶体结构方面也表现突出,且作为添加剂对抗体二级结构影响小.说明抗体的构象稳定性和胶体稳定性相互影响;山梨糖可作为HVAB的优稳定剂.
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人朊病毒蛋白及其突变体的溶剂可及性和模拟分析
朊病毒是一种全新类型的致病因子,以一种全新的致病机制造成许多神经退化性疾病.它的致病性主要由于PrPC向PrPSc构象转变而造成.为了探讨PrPC向PrPSc转变过程中PrP分子构象变化的机制, 我们计算分析了人天然PrP分子及不同的单残基突变体(如M166V,S170N,E200K和R220K)的氨基酸残基溶剂可及性, 并对天然PrP分子及其突变体进行了结构重叠模拟和RMS偏量分析.结果表明:由于166位等单个残基的突变, 造成PrP突变体与天然蛋白的局部结构出现较大差别, 使得部分残基的溶剂可及表面积发生了较大变化, 并且部分残基改变了它们的位置, 同时也影响蛋白质表面的电荷分布, 这些改变是为了更好地适应次级相互作用的局部环境.分析表明PrP与一般球蛋白在性质上有一定的差异, 说明PrP分子并不是一种稳定的球蛋白结构, 只是一种折叠中间物.
