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甲醇补加方式文献资料
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表达HPV18晚期蛋白L1重组毕赤酵母在30L Sartorious生物反应器(C30-3)中的培养与诱导工艺摸索及优化
采用改良后的低盐培养基在30 L Sartorious生物反应器(C30-3)对表达18型人乳头瘤病毒(Human papillom avirus,HPV)晚期蛋白L1重组毕赤酵母进行培养,探讨了在重组毕赤酵母细胞积累阶段和HPV18晚期蛋白L1诱导表达阶段不同的培养基配方、pH值、温度、搅拌转速、溶氧(DO)、重组毕赤酵母细胞积累阶段甘油的补加方式、去除阻碍物甘油的去阻碍时间、重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1阶段诱导剂甲醇的补加方式等工艺参数对表达HPV 18晚期蛋白L1重组毕赤酵母的影响.优化后的低盐培养基更适合重组毕赤酵母细胞的生长;重组毕赤酵母细胞积累阶段的培养过程中维持培养液pH值5.0,温度31℃,DO 20％ ～ 25％,搅拌转速500 r/min,培养到第20 h开始以恒速补加3 000 mL 40％甘油溶液,培养至重组毕赤酵母细胞湿重≥190g/L,停止甘油补加,继续培养重组毕赤酵母4h,消耗阻碍HPV18晚期蛋白L1表达的甘油;之后进入重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1诱导阶段,维持培养液pH值5.2,温度29 ℃,DO含量45％,搅拌转速600 r/min,控制培养液中甲醇浓度为4％在线补加甲醇,诱导60 h,HPV18晚期蛋白L1的表达量达到了311.43 mg/L.利用30 L Sartorious生物反应器(C30-3)对表达HPV18L1重组毕赤酵母进行培养,经过多次试验建立起了稳定的重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1工艺.
