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应用抑制性ELISA法测定动物源性生物材料中α-Gal抗原
动物源性生物材料因其来源丰富且功能完备被广泛用于临床治疗,但由于其大量表达的α-Gal抗原(Galactosyl α-(1,3)-galactosyl β-1,4-N-acetylglucosaminyl,α-Gal epitopes)能够与人体内α-Gal抗体特异性结合,导致超急性移植排斥和慢性免疫毒性反应使移植失败.该研究以临床常见的动物源性生物材料作为研究对象,通过α-Gal抗原特异性单抗M86参与的抑制性ELISA方法,定量检测了材料中α-Gal抗原.实验结果表明,每毫克两种成品生物骨的α-Gal抗原含量为(3.9±0.73)×105～ (4.7±0.85) ×105个,明显少于同等重量的原材料牛骨组织,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).皮肤修复膜中α-Gal抗原含量亦少于其原材料牛皮组织(P＜0.05).同时,该抑制性ELISA方法具有良好的回收效率.由此表明,抑制性ELISA方法能够快速、特异性检测异种移植材料中α-Gal抗原含量,从而为α-Gal抗原相关的异种移植免疫学研究和临床应用提供实验依据.
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原代猪肝细胞及主动脉内皮细胞的提取和培养
目的 建立有效高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞提取和培养的方法.为异种移植排斥反应的靶细胞——血管内皮细胞和肝细胞的研究提供基础.方法 从野生巴马猪分离肝脏和主动脉血管,通过蠕动泵灌注Ⅱ型胶原酶消化的方法提取猪肝细胞,低速离心和差速贴壁法纯化肝细胞,过碘酸雪夫(PAS)染色、白蛋白与肝细胞核因子4α免疫荧光染色对原代肝细胞进行鉴定;利用Ⅰ型胶原酶血管管腔灌注消化法提取猪主动脉内皮细胞,并通过检测因子Ⅷ相关抗原vWF及内皮细胞吞噬乙酰化低密度脂蛋白的方法进行鉴定.结果 通过本文方法提取到了大量高活力的原代猪肝细胞和主动脉内皮细胞,猪肝细胞可以连续培养一周,内皮细胞可进行传代培养和冻存.两种细胞分别表达肝细胞和内皮细胞标志性蛋白.结论 本研究提供的原代猪内皮细胞和肝细胞提取方法是制备大量高活力的原代内皮细胞及肝细胞的可靠方案.
