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人OX40-IgG1融合基因文献资料
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重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础.方法:根据基因库公布的人OX40和hlgGl Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体.再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40lg基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量.结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确.重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞.得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达.结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白.
