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O-GlcNAc糖基转移酶表达下调对tau蛋白磷酸化的影响
目的: 以人O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对HEK293T细胞中OGT基因表达的抑制作用,以及这种抑制作用对tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响.方法: 根据人OGT基因序列特点,设计高效且特异性强的siRNA.用脂质体转染siRNA进入HEK293T细胞,通过实时PCR检测siRNA对OGT基因表达的抑制.用蛋白免疫印迹法检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化.结果: 设计的siRNA能够有效抑制OGT基因的表达,与空白组相比,抑制效率可达78.1%左右.OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高.结论: tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在阿尔茨海默尔病的发生发展中起关键作用.
关键词： 阿尔茨海默尔病 Tau蛋白 O-GlcNAc糖基转移酶 RNA干扰 -
O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯
目的:本文为进一步研究蛋白O-GlcNAc糖基化修饰提供重要资源.方法:为了探索制备纯化具有生物学活性的重组OGT的有效方法,本文用大肠杆菌和Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT.携带人OGT cDNA的PET32a质粒在大肠杆菌中表达出带有1个S-Tag的重组人OGT融合蛋白,然后用与S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化OGT融合蛋白.结果:其纯化的OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性,但其活性在洗脱后丧失.在Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝OGT带有一His6tag,经镍离子螯合柱纯化后,其比活性达到0.88 nmol·min-1·mg-1 OGT.结论:在这两个表达系统中制备重组OGT各有利弊.
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洗心汤对SAD大鼠脑内tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰相关酶的影响
目的建立SAD动物模型，研究名方洗心汤对SAD模型大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰中蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶（OGT）、和糖苷酶（O-GlcNAcase）的影响，探讨名方洗心汤防治SAD的可能作用机制。方法将SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐对照组、名方洗心汤小、中、大剂量组。治疗结束及行为学测试之后，以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰过程中OGT、O-GlcNAcase酶表达的变化。结果名方洗心汤能显著提高SAD大鼠海马OGT的表达，降低O-GlcNAcase的表达，组间差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比无显著性差异（P>0.05）。结论名方洗心汤能够调节O-GlcNAc糖基转移酶和糖苷酶的表达，从而提高SAD大鼠海马组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平。
